一、基礎(chǔ)信息

貨號(hào)：LS004176  

英文名稱(chēng)：Collagenase, Type 2 (CLS-2)  

中文名稱(chēng)：2型膠原酶  

CAS號(hào)：9001.12.1  

規(guī)格：  1g、15g、100mg  

品牌：Worthington-Biochem  

產(chǎn)品類(lèi)別：組織解離酶  

應(yīng)用領(lǐng)域：生物醫(yī)學(xué)研究、細(xì)胞培養(yǎng)、單細(xì)胞懸液制備、原代細(xì)胞分離等  

二、產(chǎn)品特性

1. 酶活性與純度  

  - 2型膠原酶是一種高純度重組蛋白酶，特異性靶向膠原蛋白的三螺旋結(jié)構(gòu)，尤其對(duì)Ⅰ型和Ⅳ型膠原纖維具有高效水解能力。  

  - 活性單位：≥150 units/mg（基于牛跟腱膠原降解標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定）。  

  - 純度≥95%（通過(guò)SDS-PAGE檢測(cè)）。  

2. 酶組分特性  

  - 含梭菌蛋白酶（Clostripain）活性，可輔助消化結(jié)締組織中的其他蛋白成分。  

  - 低蛋白酶活性，減少對(duì)細(xì)胞表面蛋白的非特異性切割，保護(hù)細(xì)胞膜完整性。  

3. 穩(wěn)定性  

  - 固體酶粉在-20℃避光保存可達(dá)24個(gè)月，液體酶溶液（如10×濃縮液）需分裝凍存（-80℃），避免反復(fù)凍融。  

  - 工作液（如含5 mM Ca2?的PBS緩沖液）在4℃可穩(wěn)定保存1周。  

4. 兼容性  

  - 適用于哺乳動(dòng)物組織（如心臟、骨、肌肉、胸腺、軟骨等）的原代細(xì)胞分離。  

  - 與DNA酶（DNase I）聯(lián)用可有效減少細(xì)胞團(tuán)塊形成，提升單細(xì)胞懸液質(zhì)量。  

三、應(yīng)用領(lǐng)域

1. 單細(xì)胞懸液制備  

  - 適用組織：心臟、骨骼肌、胸腺、甲狀腺、唾液腺等富含膠原纖維的組織。  

  - 操作流程：  

    - 組織碎至2-4 mm3碎塊。  

    - 加入含2型膠原酶的消化液（推薦濃度：0.5-2 mg/mL），37℃振蕩孵育30-90分鐘。  

    - 終止消化：加入含血清的培養(yǎng)基中和酶活性。  

    - 過(guò)濾（70-100 μm濾網(wǎng)）后離心收集細(xì)胞。  

2. 原代細(xì)胞培養(yǎng)  

  - 用于分離胰島細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞等，尤其適用于對(duì)細(xì)胞活性要求高的實(shí)驗(yàn)。  

3. 腫瘤研究  

  - 分離腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞（CAFs）及實(shí)體瘤中的浸潤(rùn)免疫細(xì)胞。  

4. 類(lèi)器官模型構(gòu)建  

  - 支持乳腺、肺等類(lèi)器官的體外培養(yǎng)，促進(jìn)組織結(jié)構(gòu)的重建。  

四、技術(shù)參數(shù)

1. 理化性質(zhì)  

  - 外觀(guān)：白色或類(lèi)白色凍干粉。  

  - 溶解性：易溶于含Ca2?的緩沖液（如PBS）。  

  - pH適用范圍：6.0-7.5（最佳pH 7.0-7.4）。  

2. 酶活定義  

  - 1單位酶活定義為：在37℃、pH 7.4條件下，每分鐘水解1 μmol牛Ⅰ型膠原所需的酶量。  

3. 推薦緩沖體系  

  - 基礎(chǔ)緩沖液：HBSS（含5 mM Ca2?、0.5 mM Mg2?）。  

  - 增強(qiáng)方案：添加0.1% BSA或5% FBS以降低酶對(duì)細(xì)胞的非特異性吸附。  

五、使用說(shuō)明

1. 消化步驟  

  - 組織預(yù)處理：用PBS沖洗組織去除血液，剪碎至均勻碎塊。  

  - 酶解反應(yīng)：  

    - 按組織重量1:5-1:10比例加入酶溶液（如1 g組織加5-10 mL酶液）。  

    - 37℃恒溫振蕩（200-250 rpm），消化時(shí)間根據(jù)組織類(lèi)型調(diào)整（心臟/骨：60-90分鐘；甲狀腺/唾液腺：30-60分鐘）。  

  - 終止消化：加入含10% FBS的培養(yǎng)基終止反應(yīng)，冰上靜置5分鐘。  

2. 細(xì)胞收集  

  - 使用40 μm濾網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞懸液，離心（300×g，5分鐘）后重懸于培養(yǎng)基。  

  - 臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)胞活性（活細(xì)胞率應(yīng)≥85%）。  

3. 常見(jiàn)問(wèn)題與解決方案  

  - 消化不夠：延長(zhǎng)孵育時(shí)間或補(bǔ)充DNase I（終濃度5 U/mL）。  

  - 細(xì)胞碎片過(guò)多：增加過(guò)濾次數(shù)或使用低濃度酶（0.1-0.5 mg/mL）。  

  - 細(xì)胞活性低：縮短消化時(shí)間，避免高溫操作。  

六、注意事項(xiàng)

1. 儲(chǔ)存與使用  

  - 避免反復(fù)凍融，建議分裝后-80℃保存。  

  - 液體酶需避光保存，防止光氧化失活。  

2. 安全操作  

  - 本產(chǎn)品為生物活性酶，操作時(shí)需佩戴手套和實(shí)驗(yàn)服。  

  - 廢棄物按生物危害廢物處理。  

3. 質(zhì)量控制  

  - 每批次提供活性檢測(cè)報(bào)告及SDS-PAGE純度驗(yàn)證結(jié)果。  

七、儲(chǔ)存條件

- 固體酶粉：-20℃避光保存，保質(zhì)期24個(gè)月。  

- 液體酶液：-80℃短期保存（建議分裝后使用），避免反復(fù)凍融。  

八、質(zhì)量保證

1. 活性驗(yàn)證：每批次通過(guò)膠原降解實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證酶活性。  

2. 純度檢測(cè)：SDS-PAGE分析顯示主帶清晰，無(wú)顯著雜質(zhì)。  

3. 批次一致性：嚴(yán)格遵循ISO 9001標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)，確保性能穩(wěn)定。  

九、供應(yīng)信息

供貨商：上海起發(fā)

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（注：本文內(nèi)容基于品牌公開(kāi)資料及行業(yè)常規(guī)信息整理，具體以品牌信息文檔為準(zhǔn)。）