Exocell Albuwell M說明書

Exocell是一家生命科學(xué)公司，為糖尿病及其并發(fā)癥管理相關(guān)的研究和開發(fā)提供市場的產(chǎn)品和服務(wù)。

Exocell是開發(fā)，營銷和執(zhí)行新型臨床和研究診斷分析的者，可幫助客戶進(jìn)行基礎(chǔ)科學(xué)研究以及關(guān)于糖尿病及相關(guān)腎臟和血管疾病診斷和治療的實驗動物和臨床研究。

Exocell Albuwell M說明書

Exocell mAlbumin

Albuwell M

分析流程圖

稀釋標(biāo)準(zhǔn)和樣品

加入抗小鼠白蛋白抗體-HRP孵育30分鐘。

制水板

加入TMB顯色劑孵育5-10分鐘加入酸性色塞

在450 nm處測量吸光度完成計算

Albuwell M：小鼠微量白蛋白尿ELISA。

用途：Albuwell M是一種酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)，用于測定小鼠尿液中白蛋白的含量。

技術(shù)背景：Albuwell M是一種評估小鼠腎功能的體外工具.該方法操作簡單，對小鼠白蛋白具有較高的特異性。這是一種競爭性的抗體捕獲酶聯(lián)免疫吸附試驗。 在一個直接的模式下被擦傷。為此，抗白蛋白抗體與辣根過氧化物酶(抗辣根白蛋白抗體-HRP)結(jié)合，即直接標(biāo)記。

為完成檢測，在小鼠白蛋白包被良好的基礎(chǔ)上加入樣品和抗小鼠白蛋白抗體-HRP。抗體與固定在固定相上的白蛋白或THA相互作用和結(jié)合。 在流體階段，因此競爭約束的概念。洗滌可將未結(jié)合的Ab-HRP-白蛋白和流體相中的其他反應(yīng)物從井中去除.只有結(jié)合了t的抗體結(jié)合物 在顯色反應(yīng)中，用四甲基聯(lián)苯胺(TMB)檢測固定相的白蛋白。反應(yīng)用酸停止，在450 nm處測定吸光度。 吸光度與流體中白蛋白濃度的對數(shù)成反比。

標(biāo)本收集和儲存：不加防腐劑的樣品收集，必要時用離心法澄清。在4℃保存1周或在-60℃保存2個月。公共關(guān)系 IOR測定，允許樣品達(dá)到室溫。不要用熱解凍冷凍樣品。

工具包內(nèi)容：您的Albuwell M工具包應(yīng)包含下列項目：

2個Albuwell M測試板

2 NHEBSA(稀釋劑)

小鼠血清白蛋白(MSA)標(biāo)準(zhǔn)

2抗小鼠白蛋白抗體-HRP結(jié)合物

2色顯色劑

2色塞

操作指南

MSA標(biāo)準(zhǔn)，NHEBSA和抗小鼠白蛋白抗體-HRP結(jié)合制劑含有0.05%的Proclin300(活性成分異噻唑酮)作為防腐劑.色塞含稀釋(2.0 N)硫酸a cash in drawer 現(xiàn)金支付

阿爾布韋爾M板是預(yù)涂和準(zhǔn)備使用。所有的試劑盒試劑都準(zhǔn)備好使用液體。結(jié)果表明，自來水洗板工藝在實驗和實際操作中具有較好的適用性。 Ality控制上下文。然而，如果沒有自來水或證明不合適，我們建議使用含有0.15 M NaCl成分的EIA洗滌緩沖液，

0.01M三乙醇胺(pH6.8)、0.05%吐溫20和0.05%Proclin 300(新配制的緩沖液可省略防腐劑)。

能夠輸送10，50，100，

需要120和200 ul。推薦可輸送50和100 ul的多通道吸管。此外，還需要小試管才能完成稀釋(微管在 (本申請)。后，需要一個微板閱讀器來測定450 nm處的吸光度。

化驗程序：允許試劑和樣品在進(jìn)行檢測前到達(dá)室溫。

標(biāo)準(zhǔn)稀釋：本程序描述了標(biāo)準(zhǔn)七(7)倍稀釋劑的制備.

每管制備8根微管，每管含200μl的NHEBSA。

管的標(biāo)簽分別為“C”和1-7。

將MSA標(biāo)準(zhǔn)的200 ul傳輸?shù)?管。

將液體吸出并排出5次，將其混合。

將200 ul溶液從1管轉(zhuǎn)移到2管。

和以前一樣混在一起。

通過7管繼續(xù)這一過程。

1-7管的稀釋度分別為10.0、5.0、2.5、1.25、0.625、0.313和0.156μg/mL。

尿液樣品稀釋液的制備：準(zhǔn)確測定尿白蛋白取決于適當(dāng)?shù)臉悠废♂尪取Ｔ诖蠖鄶?shù)情況下，1：13稀釋就足夠了，但是收集方法和動物知識。 dney功能(或功能障礙)可能導(dǎo)致異常高或極低的濃度。對于初步研究，明智的做法是在三種濃度下完成分析，即1：20。 和1點80分。所獲得的結(jié)果將允許選擇宜(單一)稀釋后的分析。

下面的示例說明了1：13稀釋協(xié)議。

為每個樣品準(zhǔn)備并貼上一根微絨毛管。

在每管中加入120 ul NHEBSA

用干燥新鮮的針尖將10μl的樣品轉(zhuǎn)移到合適的管子上，用反復(fù)吸入和排出的方法沖洗出針尖。

把管子旋渦一下。

對其余的樣本繼續(xù)這一過程。

每個樣品現(xiàn)在稀釋1：13在NHEBSA。

添加對照、標(biāo)準(zhǔn)MSA稀釋物和樣品到板上：用不可磨滅的標(biāo)記(1-12)標(biāo)記條帶。這將允許重建板，如果在瓦邦期間脫落的條帶。 城建程序。稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)和樣品可直接添加到干板上。

這個平板設(shè)計包括兩個對照：一個稱為C0的陰性對照和一個稱為C1的正對照。這些分別放置在A1和A2井中。所有其他井都有稀釋井。 ARD或稀釋樣品。測定量為50μl。

從管C到A1井加入100 ul的NHEBSA。這是負(fù)控制的“C0”，并將用于規(guī)范或“空白”的微型平板閱讀器。

從C管到A2井加50μl的NHEBSA。這是陽性對照“C1”，并作為一個定性指標(biāo)的分析性能。

用一個新鮮的針尖，在標(biāo)準(zhǔn)稀釋數(shù)7中預(yù)濕頂部，并將50μl的流失量轉(zhuǎn)移到h1和h2井。

用同樣的針尖，在標(biāo)準(zhǔn)稀釋數(shù)6中預(yù)濕/沖洗針尖，并將50μl的液體轉(zhuǎn)移到G1和G2井。

繼續(xù)以這種方式將稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品轉(zhuǎn)移到盤子上，即預(yù)先潤濕/沖洗針尖，然后依次轉(zhuǎn)移標(biāo)準(zhǔn)的異形物。

使用一種新的針尖，在次稀釋樣品中預(yù)濕針尖，并將50μl的液體轉(zhuǎn)移到A3和A4井。

注意更換針尖，每次都要預(yù)濕，繼續(xù)往盤子里加入稀釋的樣品。

該平板現(xiàn)在包含控制和稀釋標(biāo)準(zhǔn)，在井A-H，1，2，和稀釋的實驗樣品一式兩份，在板的平衡。

初步孵育：與抗小鼠白蛋白抗體-HRP結(jié)合物的反應(yīng)

在WellsA2-A12和B-H1-12上加入50μl的抗小鼠白蛋白抗體-HRP結(jié)合物.

蓋上盤子，孵育30分鐘。

洗盤：使用洗碗機或用手洗盤子，如下所示：

從井中取出液體，即吸出液體或倒入水槽。

用清水或沖洗緩沖液將井注滿。

像以前一樣去除液體。

“2”和“3”構(gòu)成一個清洗周期。

重復(fù)這個過程，總共產(chǎn)生10個清洗周期。

將盤子倒置在紙巾上，輕輕拍打，去除多余的液體。

色彩發(fā)展：

添加100 ul顏色開發(fā)人員到每個井。

5-10分鐘

每口井加100μl的彩色塞子。

分析：檢查盤子。在A1井中的負(fù)控制井C0應(yīng)該有很少或沒有顏色，而在A2井中的正控制井C1應(yīng)該是強烈的顏色。 在盤子里。其余的井應(yīng)該表現(xiàn)出在這兩個之間的潛逃。

這種分析假設(shè)計算機和分析軟件，例如MS Excel是可用的。

使用平板閱讀器在450 nm處測定吸光度，用A1中的C0井“空白”閱讀器。

準(zhǔn)備一份電子表格，輸入適當(dāng)?shù)臄?shù)據(jù)，包括標(biāo)準(zhǔn)稀釋度、濃度、樣品稀釋度和吸光度數(shù)據(jù)。確定復(fù)制井的平均值。

用x軸上的對數(shù)[MSA]和y軸上的平均吸光度，準(zhǔn)備一幅標(biāo)準(zhǔn)稀釋度的半對數(shù)圖。這是劑量-反應(yīng)或標(biāo)準(zhǔn)曲線。

屬于劑量-反應(yīng)曲線線性部分的數(shù)據(jù)構(gòu)成了試驗的可用部分。

將這些數(shù)據(jù)進(jìn)行半對數(shù)分析，得到一個形式的數(shù)學(xué)模型。

log10[MSA]=mA 450 b

MSA濃度是通過從這個方程中提取計算值的反對數(shù)來確定的。

乘以13(或反稀釋因子)校正稀釋。

質(zhì)量控制：

記錄保存：很好的實驗室實踐是記錄試劑盒組件和試劑的批號和日期。

樣品處理：如上文所述，樣品應(yīng)被保護(hù)、處理和存儲。老鼠的尿液經(jīng)常被食物和糞便物質(zhì)污染，這些污染物具有潛在的來源。 錯誤。建議進(jìn)行離心澄清樣品。

稀釋標(biāo)準(zhǔn)和樣品仔細(xì)。對于這些標(biāo)準(zhǔn)，可以使用一個單一的來準(zhǔn)備稀釋序列。對于實驗樣本，每個尿液樣本都應(yīng)使用新鮮的。

限制，邊界:

樣品不得含有HRP抑制劑，即Sodium azide。這些都會影響結(jié)果

研究人員有責(zé)任確定尿液中是否存在實驗化合物或其代謝物會影響檢測結(jié)果。

嚴(yán)重的微生物污染可能影響檢測結(jié)果。

血尿樣本即使經(jīng)離心澄清，也不適合使用，因為血液流動是污染的跡象，而且血液中的白蛋白濃度約為2 000蒂姆。 通常在尿液中發(fā)現(xiàn)的。精液中含有大量的白蛋白，也是潛在的污染源。

解決問題：

添加顏色開發(fā)人員后不會出現(xiàn)顏色：一個或多個試劑可能受到8 oC以上存儲的不利影響?？赡軟]有添加一個或多個試劑。重復(fù)試驗。一定要儲存t 他的裝備很合適。

水井中的顏色太輕：可能需要與顏色顯影劑進(jìn)行更長時間的孵化。如果顯影10分鐘后顏色仍然太淺，重復(fù)檢測，但增加初級孵育 1 小時，鐘頭.

井中顏色太暗：縮短開發(fā)時間。如果5分鐘的發(fā)育仍然太暗，重復(fù)檢測，并將二次孵化減少到15分鐘。

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