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mypols 7101說明書

發布時間:2018/8/16      點擊次數:1497

myPOLS Biotec是一家來自康斯坦茨大學的生物技術公司,來自Andreas Marx教授的研究小組。憑借我們在高通量DNA聚合酶設計方面的專業知識,我們為您的應用定制酶。

myPOLS Biotec正在開發新一代的DNA聚合酶

用于和可靠的應用,例如個性化醫療,病原體檢測,DNA和RNA診斷,法醫學等等。

 

我們的研發活動包括:

  • 改進的DNA聚合酶用于SNP檢測和甲基化特異性PCR。
  • 病原體檢測分析,例如用于流感和諾如病毒診斷。
  • 具有逆轉錄酶活性的熱穩定DNA聚合酶。
  • 抑制劑抗性聚合酶,用于從樣品中直接PCR,如全血,唾液,細菌,細胞 - 顆粒,植物等。 

后但并非不重要:我們所有的酶和混合物都是在康斯坦茨內部生產的,并經過常規測試,符合高質量標準。

 

VolcanoCell2G RT-PCR 2x Master Mix

Article

Product

Size

#7101S

VolcanoCell2G RT-PCR 2x Master Mix (including separate lysis buffer)

100 reactions à 25 µl, 1 x 1.25 ml

#7101M

VolcanoCell2G RT-PCR 2x Master Mix (including separate lysis buffer)

500 reactions à 25 µl, 5 x 1.25 ml

 

該混合物專門針對直接從電池應用進行了優化。

省略耗時且昂貴的RNA純化。VolcanoCell2G RT-PCR 2x Master Mix使您能夠直接從細胞懸液或細胞裂解液中定量和檢測RNA,無需純化步驟。只需將細胞分離,將細胞懸浮液直接添加到RT-PCR反應混合物中,放入實時儀器中,然后啟動。

任選地,使用裂解緩沖液直接在孔或燒瓶中裂解細胞,簡單地旋轉并將上清液直接加入到RT-PCR混合物中。 - 準備好了。

裂解物也可以冷凍并儲存在-20℃。

 

應用

  • 使用引物/探針或實時PCR染料直接從細胞RNA檢測和定量
  • 每個樣品100-10.000個細胞的基因表達分析。
  • 適用于多種細胞類型

VolcanoCell2G可以直接從細胞中進行靈敏的RNA檢測:  

一個)

 

b)

 

圖1. 直接來自細胞RT-qPCR的0步驟

a)直接來自細胞RT-qPCR的0步驟的工作流程比2步驟標準RT-qPCR更容易和更快。b)從Lund人中腦(LUHMES)細胞中檢測到GAPDH mRNA,其根據VolcanoCell2G方案(包括單獨的裂解緩沖液)重懸浮。

反應設置

零件

終濃度

VolcanoCell2G RT-PCR 2x Master Mix

12.5μl

1X

引物前移(10μM)*

1μl

0.4μM(0.05-1μM)

引物反向(10μM)*

1μl

0.4μM(0.05-1μM)

探針(10μM)

1μl

0.4μM(0.05-1μM)

模板**:

細胞懸浮液(無核酸酶水)***

要么

細胞裂解液(在1x裂解緩沖液中)***


1 - 

9.5μl2.5μl


<10.000個細胞/反應

<10.000個細胞/反應

不含核酸酶的水

總反應體積高達25μl

 

將所有組件保存在冰上。
在使用前仔細旋轉并混合所有溶液。

*請注意,Volcano RT-PCR混合物是從DNA和RNA模板擴增的,因此必須使用僅與外顯子 - 外顯子連接結合的RNA選擇性引物。

**建議的細胞數是懸浮在無核酸酶水或1x VolcanoCell2G裂解緩沖液中的10-10,000個細胞。細胞懸浮液應按照隨附手冊的“方法”部分的建議進行新鮮制備。

***細胞培養的模板可直接通過在無核酸酶水中稀釋細胞沉淀(產品手冊的METHODS部分中的方案1)或通過用1x VolcanoCell2G裂解緩沖液裂解孔或管中的細胞來制備(方案2)在產品手冊的METHODS部分中,當需要從不同的孔(例如:在微量滴定板上)制備RT-PCR反應時,這對于高通量測定可能更有用。

 

 

典型的0步RT-PCR方案(不需要等溫逆轉錄步驟)

溫度

時間

初始變性

95℃

3分鐘

變性

95℃

15秒

退火/延伸*

55-75℃下

60秒(25-40周期)

保持

<10℃

保持

*通常,退火溫度比所用引物的計算熔融溫度低約3-5℃。通過運行溫度梯度理想地建立新的PCR,以便找到每個引物對的宜退火/延伸溫度。還可以應用三步協議,具有單獨的退火和延伸步驟。

詳細的產品說明

該試劑盒包含一種工程化,極熱穩定的逆轉錄酶和組合的DNA聚合酶,包括一個特別優化的緩沖系統,只需要少量細胞(100到10,000個細胞)。套件中還包含單獨的裂解緩沖液。

所包含的Volcano2G DNA聚合酶通過多代定向人工進化而設計,并且在95℃下的半衰期> 40分鐘。它直接從細胞懸浮液或裂解物中促進“零步”RT-PCR,無需等溫逆轉錄步驟。

VolcanoCell2G RT-PCR 2x Master Mix包含所有標準實時循環儀器中成功可靠的RT-PCR所需的所有組分,并且與常見的RT-PCR檢測方法兼容,如熒光實時PCR染料或熒光探針。

推薦的擴增子大小應在60-300 bp之間。?

請注意,必須使用跨越外顯子 - 外顯子連接的引物,以限制僅對mRNA靶標的擴增。

通過避免昂貴,耗時的細胞裂解或RNA純化,VolcanoCell試劑盒是高通量應用,RNAi敲除或基因表達實驗的理想選擇。預先準備好的2x混合物可確保可重復的RT-PCR結果,顯著縮短設置時間和移液錯誤的風險。只需添加引物和模板。用包含的裂解緩沖液可以容易地制備細胞裂解物。但是,擴增子的大小宜在60-300 bp之間!

 

產品的成分/含量

VolcanoCell2G RT-PCR 2x Master Mix含有工程DNA聚合酶,在具有dNTP的應用優化緩沖系統中具有逆轉錄活性。還包括單獨的裂解緩沖液。

 

質量控制

RT-PCR活性:測試VolcanoCell2G RT-PCR 2x Master Mix的成功RT-PCR性能。在實時PCR循環儀中從人總RNA提取物擴增151bp片段(HPRT1 mRNA),并將其顯示為單一擴增產物。

DNA聚合酶活性:已經使用人工DNA模板和DNA引物監測Volcano2G聚合酶活性并將其調整為特定的DNA聚合酶活性。
通過蛋白質特異性染色確定酶濃度。有關批次特定濃度,請通過info@mypols.de查詢更多信息。

 

存儲

本產品采用冷藏包裝。請在抵達-20°C時存放產品。通過以等分試樣存儲來小化凍融循環的次數。對于日常使用,我們建議將等分試樣保持在4°C。

 

參考

Chovancova,P.,Merk,V.,Marx,A.,Leist,M.,Kranaster,R。(2017)反向轉錄定量PCR直接來自沒有RNA提取且沒有等溫逆轉錄的細胞:'零步'RT-qPCR協議。Biol Methods Protoc(2017)2(1):bpx008。doi:https://doi.org/10.1093/biomethods/bpx008

 

Blatter,N.,Bergen,K.,Nolte,O.,Welte,W.,Diederichs,K.,Mayer,J.,Wieland,M。和Marx,A。(2013),RNA的結構和功能 - 閱讀耐熱DNA聚合酶。Angew。化學。詮釋。Ed。,52:11935-11939。DOI:10.1002 / anie.20130665。

 

Kranaster,R.,Drum,M.,Engel,N.,Weidmann,M.,Hufert,FT和Marx,A。(2010),一步RNA病原體檢測,具有逆轉錄酶活性的突變熱穩定Thermus aquaticus DNA聚合酶。Biotechnology Journal,5:224-231。DOI:10.1002 / biot.200900200。

貨號

品名

規格

品牌

8100S

Volcano2G DNA聚合酶

 250 U5U /μl50μl

mypols

8100M

Volcano2G DNA聚合酶

1000U5U /μl200μl

mypols

6101S

Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix

100 reactions á 25 µl

mypols

1 x 1.25 ml

mypols

6101M

Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix

500 reactions á 25 µl

mypols

5 x 1.25 ml

mypols

6201S

Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix (+ROX)

100 reactions á 25 µl

mypols

1 x 1.25 ml

mypols

6301S

Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix (+GreenDye)

100 reactions á 25 µl

mypols

1 x 1.25 ml

mypols

6401S

Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix (+GreenDye, +ROX)

100 reactions á 25 µl

mypols

1 x 1.25 ml

mypols

7101S

VolcanoCell2G RT-PCR 2x Master Mix (including separate lysis buffer)

100 reactions à 25 µl, 1 x 1.25 ml

mypols

7101M 

VolcanoCell2G RT-PCR 2x Master Mix (including separate lysis buffer)

500 reactions à 25 µl, 5 x 1.25 ml

mypols

 

 

上海起發實驗試劑有限公司是實驗試劑一站式采購服務商

1:*的進口輻射能力,血清、抗體、耗材、大部分限制進口品等。

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