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Integral 表位映射服務

發布時間:2018/7/27      點擊次數:2366

Integral Molecular是一家研究驅動的生物技術公司,為未被開發的膜蛋白靶標(包括GPCR,離子通道,轉運蛋白和病毒包膜)創造創新技術和治療性抗體。整合膜蛋白包括關鍵的治療靶,但由于其結構復雜性和不能在構象完整狀態下從脂質膜中除去而難以研究。在Integral Molecular,我們開發創新技術和產品,以滿足這些苛刻但重要的目標。

 

 

 

表位映射服務

即使對于復雜蛋白質和構象表位,高分辨率構象表位作圖也成功> 95%。

表位數據如何幫助我?

一種可靠的表位作圖方法使您能夠根據作用機制取得先導候選物,并使用更強的保護單克隆抗體。

表位差異化作用機制

 

 

 

表位圖加強知識產權

 

 

您的表位定位技術有何不同?

Integral Molecular專有的Shotgun Mutagenesis技術是唯yi能夠以單一氨基酸分辨率可靠地繪制構象表位的高通量技術。

 

 

 

 

到目前為止,我們已經繪制了1,000多個表位,成功率> 95%,包括高度復雜的表位,例如:

  • GPCR,轉運蛋白和病毒結構蛋白上的表位。
  • 構象表位。
  • 多亞基蛋白的表位。
  • 受體狀態依賴性表位。

“Integral Molecular所做的表位作圖極大地支持了我們的機制理解和我們專有抗體的知識產權主張。”

為什么這種方法如此成功?

Integral Molecular評估直接在完整細胞內與靶蛋白結合的抗體。使用專有的Shotgun Mutagenesis技術對每個單獨的殘基進行突變,以高通量創建突變體,從而解析結合特異性。

 

使用Shotgun Mutagenesis技術的表位作圖:

  • 自動創建數百到數千個點突變,覆蓋靶蛋白中的每個殘基,因此可以用單個氨基酸分辨率定位表位。
  • 誘變為丙氨酸或任何其他所需的殘基。
  • 人細胞中單個突變體的天然表達,使得能夠繪制構象表位。
  • 每個突變體的高通量測試表達,抗體反應性和功能。
  • 三維結構上的表位可視化。

你提供什么表位標測服務?

表位映射服務是按收費服務提供的,Integral Molecular提供對所有數據的訪問,以便提供監管和知識產權申請。

表位映射服務包括:

  • 分析設置報告,具有篩選客戶MAb的優化條件。
  • 丙氨酸掃描誘變靶蛋白。
  • 對Ala掃描突變陣列進行MAb篩選。
  • 終報告顯示:
    • 1.數據的圖形表示。
    • 2.確定關鍵的相互作用殘基。
    • 3.表位定位于靶蛋白結構(如果可用)。

自定義表位映射服務

為感興趣的蛋白質靶標創建Ala掃描突變文庫,并用于通過流式細胞術測試客戶MAb /配體的結合以鑒定表位殘基。

聯系討論您的項目。

預驗證目標上的表位映射服務

Integral Molecular為表位作圖服務提供了一系列預先驗證的目標,包括:

CXCR4

傳染病/腫瘤學

HER2

腫瘤科

RSVF

病毒學

Zika prM / E.

病毒學

聯系獲取預先驗證目標的完整列表。

 

 

映射小分子結合位點

為感興趣的蛋白質靶標創建Ala掃描突變文庫。使用功能測定法在文庫上篩選小分子以鑒定對結合或功能至關重要的氨基酸殘基。

參見小分子作圖的實例:在GPCR CXCR4上的GPCR TAS2R16作圖上的作圖  見附件

“Integral Molecular能夠識別抗體的關鍵結合殘基,在開發多年后未成功完成作圖。”

“的團隊,良好的溝通,承諾的結果,影響決策的結果。”

-CELL生物學領導發現腫瘤學計劃

Integral Molecular如何執行其表位映射服務?

我們的表位作圖方法利用Shotgun Mutagenesis,一種用于高通量誘變的專有平臺。基本上,我們采用蛋白質的序列并合成將每個氨基酸分別突變為丙氨酸的變體(如果它已經是丙氨酸,則為絲氨酸)。然后將編碼僅具有單個丙氨酸突變的全長蛋白質的這些變體中的每一個排列到384孔板的各個孔中并在人細胞中表達。使用高通量流式細胞儀,我們可以確定您的抗體與每種蛋白質變體的結合,并控制表達,運輸和折疊中的缺陷。因此,該方法鑒定了對抗體與靶蛋白結合至關重要的氨基酸。

與其他方法(如肽圖或H / D交換)相比,Shotgun Mutagenesis Epitope Mapping有哪些好處?

Shotgun Mutagenesis Epitope Mapping通過在全長蛋白的背景下單獨突變靶蛋白的每個氨基酸,在人細胞中表達這些變體并測量抗體與每種變體的結合來起作用。使用該方法,可以在氨基酸分辨率下鑒定線性和構象表位。這與肽作圖形成對比,肽作圖確定抗體與短肽的結合,不依賴于蛋白質三級結構,從而排除其用于作圖構象表位的用途。與H / D交換相比,Shotgun Mutagenesis Epitope Mapping不需要可溶形式的靶蛋白,并且依賴于易于解釋的流式細胞術數據,簡化了分析和解釋。終,

您如何控制導致蛋白質錯誤折疊或表達和/或販運缺陷的突變?

對照抗體用于驗證突變的蛋白質表現出適當的運輸,表達和折疊。通常,市售試劑抗體或由顧客針對相同靶標產生的非競爭抗體將用作對照。如果對于給定蛋白質不存在對照抗體,則可以將表位標簽(FLAG,V5,HIS6等)添加至靶蛋白并用作表達和運輸的對照。

表位映射項目的可交付成果是什么?

個可交付物是分析設置報告,顯示在開始誘變之前使用野生型蛋白質構建體對每種抗體的*高通量篩選條件。完成項目后,將編制終報告,其中包括數據的圖形表示,關鍵相互作用殘基的識別以及映射到目標蛋白質結構上的表位(如果有的話)。如果需要,Integral Molecular很樂意協助客戶準備用于出版,介紹或/監管備案的表位作圖數據。

可以測試哪種蛋白質?

表位作圖可以在任何可以在哺乳動物細胞中表達的蛋白質上進行,包括可溶性蛋白質和構象復雜蛋白質,如GPCR,離子通道,轉運蛋白和病毒包膜蛋白。

Epitope Mapping項目的典型周轉時間是多少?

定制表位作圖項目通常需要3-4個月。

需要什么才能開始?

我們需要蛋白質序列和500μg每種抗體被映射。

Shotgun Mutagenesis可以使用哪種檢測方法?

適用于微孔板形式的任何基于細胞的測定可用于Shotgun誘變。先前的項目通常包括鈣通量,病毒感染和基于流式細胞術的免疫熒光測定。

 

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