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Glycotech 平行板流室操作說(shuō)明書

發(fā)布時(shí)間:2018/4/3      點(diǎn)擊次數(shù):1850

世界*實(shí)驗(yàn)材料供應(yīng)商 GlycoTech正式授權(quán)上海起發(fā)為其中國(guó)代理, GlycoTech在一直是行業(yè)的*,一直為廣大科研客戶提供zui為的產(chǎn)品和服務(wù),上海起發(fā)一直秉承為中國(guó)科研客戶帶來(lái)的產(chǎn)品,的服務(wù),簽約 GlycoTech就是為了給廣大科研客戶帶來(lái)更加完善的產(chǎn)品和服務(wù),您的滿意將是我們zui大的收獲

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GlycoTech始建于1991年,是美國(guó)國(guó)內(nèi)的專注于糖復(fù)合物生物功能和醫(yī)療應(yīng)用研究的生物公司。該公司建立有自己的研究項(xiàng)目,并開(kāi)發(fā)了大量知識(shí)產(chǎn)權(quán)組合。另外,利用多年來(lái)發(fā)展的產(chǎn)品業(yè)務(wù),GlycoTech建立了zui大的稀有糖類試劑和相關(guān)技術(shù)的數(shù)據(jù)庫(kù)之一。

GlycoTech在過(guò)去的六年中一直與諾華制藥公司(Novartis)維持著企業(yè)合作關(guān)系,目的在于共同開(kāi)發(fā)一類可作為強(qiáng)效拮抗劑的糖配體小分子模擬物,這些模擬物能抑制移植誘導(dǎo)的再灌注損傷中發(fā)生的血液淋巴細(xì)胞的異常外滲現(xiàn)象。近期與Chiron公司簽訂了許可協(xié)議,允許其范圍銷售Glycotech專有的以抗糖類腫瘤標(biāo)記物為基礎(chǔ)的癌癥診斷方面的產(chǎn)品。不僅如此,與國(guó)家衛(wèi)生研究院,賓夕法尼亞大學(xué),羅徹斯特大學(xué)和芝加哥神經(jīng)外科和神經(jīng)學(xué)科研研究院的合作項(xiàng)目也逐一得到開(kāi)展。

GlycoTech正積極尋找其他的制藥合作公司,可著重提供糖生物領(lǐng)域的一系列專業(yè)技術(shù)。GlycoTech公司的結(jié)構(gòu)和發(fā)展策略都非常適合合作者快速得到*的專業(yè)知識(shí),并且可以避免承擔(dān)因公司內(nèi)部發(fā)展引發(fā)固有財(cái)政責(zé)任的相關(guān)義務(wù)。

 

 

 

平行板流動(dòng)室中的動(dòng)態(tài)流動(dòng)分析

流動(dòng)檢測(cè)可以在明確的壁面切應(yīng)力下觀察細(xì)胞粘附。細(xì)胞粘附的不同事件的可視化可以通過(guò)選擇性圖像采集和隨后的圖像處理來(lái)量化。流動(dòng)測(cè)定法特別適合于研究粘附事件,該事件在比大多數(shù)靜態(tài)粘附測(cè)定法更短的時(shí)間范圍內(nèi)發(fā)生得非???。另外,可以研究初始事件之后的事件,例如細(xì)胞穩(wěn)定和擴(kuò)散,從而給出特定細(xì)胞 - 細(xì)胞或細(xì)胞 - 基底粘合劑行為的動(dòng)力學(xué)的一些洞察。

 材料:

顯微鏡:

 

倒相顯微鏡配置為相襯和熒光操作

物鏡(6.3 x,10 x,40 x)

階段孵化器

生物:

 

細(xì)胞懸液(嗜中性粒細(xì)胞,癌細(xì)胞)

在35mm培養(yǎng)皿中的細(xì)胞單層或涂覆的基質(zhì)

粘附介質(zhì)(含有12mM Hepes的無(wú)血清培養(yǎng)基)

纖連蛋白(人血漿)

牛血清白蛋白(BSA)

流室系統(tǒng):

 

帶密封墊和管件的流量室甲板

35毫米組織培養(yǎng)皿

哈佛注射泵

適用于泵的玻璃注射器(3,5,20或60 cc)

硅橡膠管

旋塞

真空泵

電腦/電子:

 

數(shù)字圖像采集和處理系統(tǒng)

顯示器

錄像機(jī)

帶控制器的CCD相機(jī)

時(shí)間日期發(fā)生器

計(jì)算機(jī)與圖像系統(tǒng)的接口

存儲(chǔ)設(shè)備的圖像

 

操作過(guò)程:

一、細(xì)胞單層制備

1.通過(guò)向每個(gè)培養(yǎng)皿中加入1ml5.5μg/ ml FN溶液來(lái)涂覆人纖連蛋白(FN)培養(yǎng)皿。

2.孵育30分鐘。在室溫下。

3.從每道菜中吸出溶液。

4. 根據(jù)達(dá)到匯合所需的時(shí)間,以0.5-3.0×10 5個(gè)細(xì)胞/ ml的接種密度向每個(gè)培養(yǎng)皿中加入2ml細(xì)胞懸浮液(Huvecs,CHO細(xì)胞)。

5. 1-5天后,在流動(dòng)測(cè)定中使用具有融合單層的培養(yǎng)皿。飼養(yǎng)細(xì)胞每2-3天,但通常不48小時(shí)。的流量測(cè)定。

二、涂層基板制備

1.用標(biāo)記筆在每個(gè)盤的中心劃出用于涂布基材的涂布區(qū)域(5mm直徑)。

2.加入20μl含10μg/ ml濃度底物的溶液至涂層區(qū)域。孵育1小時(shí)。

3.吸出液體,加入20μl1%BSA封閉1小時(shí)。

4.吸走BSA,加入20μl抑制劑1小時(shí)。

5.菜肴已準(zhǔn)備好用于流動(dòng)測(cè)定。

三、使用平行板流動(dòng)室的流動(dòng)分析

1.打開(kāi)階段培養(yǎng)箱和溫?zé)嵴澈辖橘|(zhì)至37°C 1小時(shí)。在開(kāi)始流動(dòng)測(cè)定之前。

2.將進(jìn)口,出口和真空管路連接到流動(dòng)室甲板上的流動(dòng)系統(tǒng)裝置。用介質(zhì)填充系統(tǒng)并去除系統(tǒng)中的所有空氣。

3.用細(xì)胞懸液填充入口儲(chǔ)液器。對(duì)于使用細(xì)胞單層的測(cè)定,推薦10 6個(gè) 細(xì)胞/ ml。對(duì)于涂布的底物測(cè)定,使用10 5個(gè)細(xì)胞/ ml。

4.通過(guò)倒轉(zhuǎn)甲板將碟子安裝到流動(dòng)室甲板上,在流道區(qū)域放置一小塊培養(yǎng)基,然后將35毫米培養(yǎng)皿放在甲板上。真空將在甲板上舉行。確保碟子在流路中沒(méi)有氣泡。

5.將組裝好的腔室放在顯微鏡臺(tái)上。

6.啟動(dòng)細(xì)胞的流式細(xì)胞注射器連接在0.1-4.0達(dá)因/厘米的范圍內(nèi)的剪切應(yīng)力至出口流動(dòng)室泵2。

7.讓細(xì)胞流動(dòng)足夠的時(shí)間以獲得足夠數(shù)量的細(xì)胞與細(xì)胞單層或涂布的表面相互作用。一般3-10分鐘。用來(lái)。

8.開(kāi)始圖像采集。在盤子上7-10個(gè)位置收集圖像。通常,在給定實(shí)驗(yàn)條件下的3個(gè)盤子提供足夠的數(shù)據(jù)以顯示處理之間的統(tǒng)計(jì)差異。

9.在所有盤上獲取圖像后,執(zhí)行圖像分析以量化流動(dòng)測(cè)定。

 

 

 

 

貨號(hào)

品名

規(guī)格

目錄價(jià)

品牌

31-001

Circular Flow Chamber Kit

1 kit

10,800

Glycotech

 

 

我們公司zui大優(yōu)勢(shì)是強(qiáng)大的采購(gòu),

1:基本什么都能進(jìn)口,血清,抗體,耗材,還有部分限制進(jìn)口的,

2:貨品全,現(xiàn)經(jīng)營(yíng)過(guò)700多個(gè)品牌,基本所有生物試劑耗材都可以進(jìn)口,特別是冷偏的產(chǎn)品那就更有優(yōu)勢(shì),

3:提供加急服務(wù),一般1-2周到貨,超過(guò)時(shí)限加急費(fèi)全免

4:價(jià)格公道,絕大部分價(jià)格有優(yōu)勢(shì),當(dāng)然不能保證100%產(chǎn)品都是,因?yàn)橐馕吨鴽](méi)有服務(wù).

5:良好的信譽(yù),大部分客戶我們提供貨到付款服務(wù),客戶包括清華,北大 交大 復(fù)旦,中山等100多所大學(xué),ROCHE,阿斯利康,國(guó)藥 ,fisher等500多家公司

6:我們*代理的品牌有:Antibody Research Corporation,arcticzymes,Biorelevant,AmberGen, Inc. ,clemente-associates,clodronaiposomes,Columbia Biosciences,enzyme research,Gene Bridges GmbH,Genovis,AmberGen, Inc.  Biotechnology GmbH,Haematologic Technologies HTI Haemtech,hookelabs,Immudex,Innovative Research of America,inspiralis ,List Biological Laboratories, Inc.,lumafluor,Microsurfaces,multiplicom,nanotools,Pel-Freez Biologicals,pentapharm,progen,Protein Ark,QA-Bio,Inc,QA-Bio,IncQuickZyme Biosciences,Teknova,TriLink BioTechnologies, Inc.,Zyagen Laboratories 等

7:我們還是invitrogen,qiagen,Midland BioProducts Corporationam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等知名*批發(fā),歡迎合作。


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