Nippon Genetics Bambanker Direct 無(wú)血清無(wú)需離心細(xì)胞凍存液

• 可在-80°C或-196°C的溫度下長(zhǎng)期凍存細(xì)胞

• 非常適合雜交瘤細(xì)胞和高通量（HTP）應(yīng)用

• Bambanker Direct可以直接加到細(xì)胞中--無(wú)需洗滌且無(wú)需離心

• 細(xì)胞復(fù)蘇后的活率高

• 即用型冷凍介質(zhì)–無(wú)需程序或順序降溫冷凍

• 無(wú)血清–無(wú)污染風(fēng)險(xiǎn)

• 保質(zhì)期長(zhǎng)

天生為了雜交瘤（Born for hybridomas）

某些細(xì)胞類(lèi)型（例如雜交瘤）對(duì)過(guò)度處理和操縱表現(xiàn)出更高的敏感性。 在長(zhǎng)期儲(chǔ)存和凍融循環(huán)后，這些細(xì)胞通常表現(xiàn)出更高的死亡率或不想要的分化。 Bambanker Direct正是針對(duì)這些類(lèi)型的細(xì)胞而開(kāi)發(fā)的，以提供嚴(yán)格的環(huán)境控制。 通過(guò)取消離心步驟，現(xiàn)在可以在添加新型冷凍保護(hù)劑Bambanker Direct后立即冷凍細(xì)胞以長(zhǎng)期保存。 只需將Bambanker Direct一對(duì)一地添加到培養(yǎng)板孔中，然后直接放入冰箱即可。 與原始Bambanker一樣，Direct版本也沒(méi)有血清，因此對(duì)于動(dòng)物來(lái)源的血清可能是一個(gè)問(wèn)題的細(xì)胞來(lái)說(shuō)非常有用。 通過(guò)使用Bambanker Direct，雜交瘤細(xì)胞可在-80°C長(zhǎng)期保存后復(fù)蘇率高達(dá)100％。

血清增加了長(zhǎng)期儲(chǔ)存的差異（Serum adds variation to long-term storage）

所有BambankerTM產(chǎn)品均不含血清。含有血清的冷凍保存培養(yǎng)基具有回收率波動(dòng)和成分不確定的缺點(diǎn)。凍存于含血清的培養(yǎng)基中的細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性可能會(huì)受到批次之間血清差異的影響，因?yàn)榈鞍踪|(zhì)和其他生物分子的組成和濃度會(huì)隨每批血清而變化。解凍和使用這種含血清培養(yǎng)基的細(xì)胞時(shí)，可能會(huì)導(dǎo)致問(wèn)題。因?yàn)锽ambankerTM的每種成分都經(jīng)過(guò)精確定義，因此您可以放心，在不同時(shí)間存儲(chǔ)的細(xì)胞都將有一致的效率。

BambankerTM可防止不期望的分化（BambankerTM prevents undesired differentiation）

不期望的細(xì)胞分化也可能是冷凍細(xì)胞長(zhǎng)期保存的一個(gè)問(wèn)題。 所有Bambanker試劑均旨在大程度地減少此問(wèn)題。 對(duì)于特別麻煩的細(xì)胞，Bambanker不含DMSO的配方經(jīng)過(guò)特殊配制，可防止可能與含DMSO的冷凍保存試劑相關(guān)的問(wèn)題。 因此，請(qǐng)加入越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)室的選擇，使用Bambanker保護(hù)其細(xì)胞系！

多能干細(xì)胞的細(xì)胞活力和ALP染色 

                    上排：解凍兩天后檢測(cè)到大量細(xì)胞。 解凍后細(xì)胞沒(méi)有形態(tài)變化 

                    下排：BambankerTM不會(huì)引起細(xì)胞分化，因?yàn)樗袃鼋Y(jié)的干細(xì)胞仍會(huì)產(chǎn)生高水平的堿性磷酸酶，這是多能干細(xì)胞的報(bào)告基因

細(xì)胞凍存液家族（Family of BambankerTM）

Bambanker 細(xì)胞凍存液-細(xì)胞凍存、解凍操作步驟

?凍存操作步驟：慢凍

①?gòu)募?xì)胞培養(yǎng)箱中取出培養(yǎng)中處于對(duì)數(shù)增殖期的細(xì)胞?！鶅龃鎸?duì)數(shù)增殖期的細(xì)胞，是可以確保細(xì)胞良好生存率中最重要的一點(diǎn)。 

②使用部分細(xì)胞用臺(tái)盼藍(lán)染色（檢測(cè)活率）并計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)量。 

③將含細(xì)胞的培養(yǎng)基移至離心管中，在合適條件（低離心力，必要低溫）下進(jìn)行離心。 

④去除上清液后，將細(xì)胞沉淀通過(guò)輕柔旋渦操作進(jìn)行懸浮。 

⑤每個(gè)凍存管中細(xì)胞數(shù)要保持規(guī)定濃度，然后再添加凍存液。 （每 1mLBambanker凍存液可凍存 5×105～1×107 個(gè)細(xì)胞）※⑤之后的操作步驟盡可能快速完成。另外，Bambanker凍存液從冷藏柜取出后，直接使用，無(wú)須平衡室溫，盡快進(jìn)行保存處理 。

⑥無(wú)需預(yù)冷細(xì)胞懸浮液，直接置于-80℃下保存。 

⑦保存液氮時(shí)，先在-80℃保存 12 小時(shí)（超過(guò)一晚），待狀態(tài)穩(wěn)定后在移至液氮中保存?！D(zhuǎn)移細(xì)胞時(shí)請(qǐng)盡快完成操作。 

?解凍操作步驟：快融 

①在 37℃恒溫箱（或者37℃水浴鍋）等設(shè)備中解凍細(xì)胞，確認(rèn)凍存管中液體融解。※此操作需迅速進(jìn)行。因?yàn)榧?xì)胞在解凍過(guò)程過(guò)極易受到損壞。

②將溶解的細(xì)胞液轉(zhuǎn)移到含有培養(yǎng)基的15ml無(wú)菌離心管中，混合后在規(guī)定條件下進(jìn)行離心 （比如：300～400×g） 

③去除上清液后，加入少量培養(yǎng)基，將細(xì)胞沉淀通過(guò)輕柔旋渦操作進(jìn)行懸浮。 

④混勻后，取出其中一部分細(xì)胞用臺(tái)盼藍(lán)染色（檢測(cè)活率）并計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)量。

⑤將混勻的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)容器中，細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)。

常見(jiàn)問(wèn)題（FAQ）

Q1. Bambanker凍存液可以使用的最小體積是多少？

對(duì)于1*106個(gè)細(xì)胞，建議使用1 mL，對(duì)于較少的細(xì)胞，您可以減少Bambanker的用量。 例如，對(duì)于5×105，請(qǐng)使用0.5 mL。

Q2. Bambanker凍存液是否包含DMSO？

除Bambanker DMSO-Free（BBF01）外，Bambanker的其他三種均包含DMSO。

Q3. 復(fù)蘇培養(yǎng)時(shí)，我們可以在不進(jìn)行細(xì)胞洗滌的情況下直接在培養(yǎng)基中使用解凍的細(xì)胞嗎？

 是的，您不需要清洗步驟。

Q4. 可以將在Bambanker中冷凍的細(xì)胞用于提取RNA嗎？

可以。 但是請(qǐng)注意，每個(gè)試管中的細(xì)胞數(shù)少（1*106個(gè)細(xì)胞）可能會(huì)導(dǎo)致分離出的RNA少。

Q5. 我們可以使用Bambanker進(jìn)行PBMC的冷凍保存嗎？

可以，

PBMC凍存的一個(gè)案例：

實(shí)驗(yàn)方案：

i）從健康人的血液中分離出PBMC

ii）PBMC在Bambanker（標(biāo)準(zhǔn)版）中冷凍，并在-80°C和-196°C（液氮）中以1×10 ^ 6細(xì)胞/個(gè)保存12個(gè)月。 1mL Bambanker 1mL等分試樣

iii）冷凍后十二個(gè)月，快速融化細(xì)胞并測(cè)量細(xì)胞數(shù)，然后使用包被抗CD3抗體的T-25培養(yǎng)瓶和含IL-2（700 U / mL）的培養(yǎng)基培養(yǎng)7天。在第5、6和7天測(cè)量細(xì)胞計(jì)數(shù)，并在培養(yǎng)的第7天進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

在-80°C下保存12個(gè)月，回收率59.5％；存活率88.9％

儲(chǔ)存在液氮中（-196°C）保存12個(gè)月，回收率63.9％；存活率87.3％

回收率=解凍后完整細(xì)胞數(shù)/最初凍存的細(xì)胞數(shù)；存活率=在設(shè)定的檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)，通過(guò)臺(tái)盼藍(lán)測(cè)定的活細(xì)胞在總細(xì)胞中所占的百分比。

Q6. 您建議如何處理特別脆弱/敏感的細(xì)胞？

冷凍技巧：冷凍敏感細(xì)胞的最佳方法是將細(xì)胞放入Bambanker（選擇合適的類(lèi)型）中，并在處理過(guò)程中將其保持在4°C。將它們盡可能快地放入-80°C的冰箱中24h。然后，將細(xì)胞儲(chǔ)存在-80°C或?qū)⒗鋬龅募?xì)胞轉(zhuǎn)移至液氮中。

解凍技巧：將小瓶放入37°C水浴中，直到內(nèi)容物融化為止。然后應(yīng)立即將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至大量預(yù)熱的培養(yǎng)基中-對(duì)于最敏感的細(xì)胞類(lèi)型（干細(xì)胞，原代細(xì)胞），逐滴添加以保持活力。盡管某些細(xì)胞可以通過(guò)離心沉淀，然后再用移液器輕輕重懸，然后添加到裝有預(yù)熱生長(zhǎng)培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，但對(duì)于大多數(shù)敏感細(xì)胞類(lèi)型，將它們?nèi)诨笾苯右迫肱囵B(yǎng)瓶中的操作更為溫和。第二天進(jìn)行培養(yǎng)基更換，以除去任何殘留的防凍劑。

Q7. 我們可以使用Bambanker冷凍保存整個(gè)類(lèi)器官嗎？

是的，Bambanker和Bambanker HRM是您的選擇。 兩者均可提供超過(guò)70％的恢復(fù)率。 我們建議每個(gè)冷凍管使用少量類(lèi)器官（低于20 mg）。 我們還建議您先將類(lèi)器官在4°C的Bambanker中浸泡10分鐘，然后再冷凍。 將正常Bambanker用于類(lèi)器官，將Bambanker HRM用于人類(lèi)臨床試驗(yàn)或人類(lèi)組織衍生的類(lèi)器官。

Q8. Bambanker可以用于果蠅嗎？

只要是凍存單個(gè)細(xì)胞，就沒(méi)有問(wèn)題。 我們沒(méi)有凍存整個(gè)生物體的經(jīng)驗(yàn)。

Q9.我可以使用Bambanker凍存受感染細(xì)胞中的病毒嗎？

只要細(xì)胞保持健康，這沒(méi)問(wèn)題。

Q10. 我可以直接使用Bambaker而不用將其恢復(fù)室溫（RT）嗎？

沒(méi)問(wèn)題，可以直接使用。

Q11. 如何使用Bambanker提高類(lèi)器官的生存率？ 我們使用20毫克的胃和結(jié)腸組織。

您可以將正常Bambanker用于動(dòng)物組織。 另外，我們建議將組織細(xì)化到20毫克以下。 您也可以在冷凍之前將組織在4°C的Bambanker中浸泡10分鐘。

Q12. 為什么我使用了Bambanker來(lái)保存細(xì)胞，但是存活率依然不高？

請(qǐng)凍存前確保細(xì)胞處于生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期，并且凍存時(shí)細(xì)胞數(shù)目控制在5×105~1×107/mL凍存液。

Q13. 我們實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)有固定的凍存程序了，如果換了你們的Bambanker，可以還繼續(xù)用原來(lái)程序降溫的方法凍存嗎？

雖然本產(chǎn)品可以無(wú)需程序降溫凍存細(xì)胞，但如果通過(guò)程序降溫盒等適當(dāng)控制了溫度下降的速度，效果更佳（如虎添翼）。

Q14. 哪些細(xì)胞株（系）適合使用Bambanker來(lái)進(jìn)行細(xì)胞冷凍保存？

幾乎所有細(xì)胞株（系）都可以使用Bambanker進(jìn)行凍存。對(duì)于較為寶貴的ES/iPS細(xì)胞的保存尤其適用。上所列舉的細(xì)胞系均已經(jīng)過(guò)測(cè)試驗(yàn)證。

但也并不排除可能有某些細(xì)胞株是不適合使用Bambanker來(lái)進(jìn)行凍存的，用戶(hù)在沒(méi)有確認(rèn)是否可使用時(shí)，建議在進(jìn)行正式細(xì)胞凍存之前先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)。

Q15. 無(wú)血清凍存液相比傳統(tǒng)含血清凍存液有什么優(yōu)勢(shì)？

無(wú)血清凍存液因不含有動(dòng)物血清，質(zhì)量更穩(wěn)定，批間差更小；同時(shí)未知生物成分或感染性物質(zhì)污染細(xì)胞的幾率也極低，尤其對(duì)于ES/iPS細(xì)胞等有可能用于再生醫(yī)療的細(xì)胞安全得以嚴(yán)格保障；可以直接凍存無(wú)血清培養(yǎng)的細(xì)胞，免去無(wú)血清再馴化的步驟；另外Bambanker無(wú)血清細(xì)胞凍存液不需要像傳統(tǒng)的血清凍存液那樣需要程序降溫，減少了用戶(hù)的繁瑣操作，節(jié)省了時(shí)間。

Q16. Bambanker在冷凍保存細(xì)胞的過(guò)程中起什么作用？

無(wú)血清細(xì)胞凍存液使用了DMSO（DMSO-Free除外）等作為保護(hù)劑，在凍存細(xì)胞時(shí)能以1℃/min左右的溫度下降而逐漸凍存，在此過(guò)程中，細(xì)胞內(nèi)的水分子被置換成保護(hù)劑，抑制胞內(nèi)和細(xì)胞周邊的冰晶的形成，防止細(xì)胞膜和細(xì)胞器結(jié)構(gòu)損傷，防止蛋白變性。