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Cygnus產(chǎn)品及應(yīng)用選擇指南

更新時間：2011-10-07 點擊次數(shù)：6439

部分藥品來源于生物組織，但產(chǎn)量有限，所以其價格十分昂貴。微生物/細胞生長迅速，容易控制，適于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。利用基因工程將合成相應(yīng)藥物成分的基因?qū)爰毎麅?nèi)，讓其產(chǎn)生相應(yīng)的藥物，不但能解決產(chǎn)量問題，還能大大降低生產(chǎn)成本。

基因工程圖

基因工程大大改變了現(xiàn)有制藥生產(chǎn)的狀況，但是基因工程產(chǎn)品中殘留的宿主細胞蛋白是影響制品純度的重要因素,反復(fù)使用含宿主細胞蛋白的基因工程制品有可能引起機體的過敏反應(yīng)。目前應(yīng)用于人類疾病治療或疾病預(yù)防的基因工程主要采用中國倉鼠卵巢細胞（CHO）作為宿主細胞。因制品中細胞蛋白殘留量低 ,用常規(guī)的理化方法無法檢測,為此需要建立細胞蛋白殘留量測定方法,對半成品進行檢定,從而更有效地保證制品的質(zhì)量 ,提高制品的安全性。

Cygnus technologies, Inc.是美國一家專門從事生物工程和制藥過程中殘留物檢測的一系列產(chǎn)品。生物制品生產(chǎn)過程中存在許多影響產(chǎn)品質(zhì)量的殘留物，諸如特殊重組表達系統(tǒng)中宿主細胞蛋白（ Host Cell protein, HCP ）的殘留以及生物制品加工過程中培養(yǎng)物殘留的污染物。公司提供了廣泛而靈敏度*的一系列用于檢測生物工程殘留物的產(chǎn)品，

Cygnus公司檢測產(chǎn)品覆蓋了常用于基因工程的培養(yǎng)細胞以及一些用于細胞培養(yǎng)的添加物。CHO細胞即中國倉鼠卵巢細胞（Chinese hamster ovary），該細胞具有不死性，可以傳代百代以上，是目前生物工程上廣泛培養(yǎng)的細胞。*批準正式應(yīng)用于人類疾病治療或疾病預(yù)防的基因工程產(chǎn)品約有三十多種，其中只有一種（乙肝疫苗）是由酵母菌生產(chǎn)的，其余所有產(chǎn)品都是由CHO細胞和大腸桿菌生產(chǎn)的，大腸桿菌不能形成有活性的二聚體（如白介素2），也不具有糖基化的功能（如EPO），而CHO卻具有如上的功能，因此CHO成為表達復(fù)雜生物大分子的理想宿主。另外CH0細胞在基因工程使用中還有一個優(yōu)點，該細胞屬于成纖維細胞（fibroblast），是一種非分泌型細胞，它本身很少分泌CHO內(nèi)源蛋白，因而檢測起來很困難。

一、 Cygnus Elisa檢測產(chǎn)品

共有39種Elisa 檢測試劑盒，包括原核、真核表達細胞宿主蛋白檢測試劑盒，細胞培養(yǎng)殘留物檢測試劑盒等。

公司產(chǎn)品：

貨號	貨名
F015	CHO HCP ELISA kit（中國倉鼠卵巢細胞）
F410	E.coli HCP ELISA Kit（大腸桿菌）
F140	Pichia pastoris HCP ELISA Kit（畢赤酵母）
F030	BSA ELISA kit
F050	Protein A ELISA kit
F050H	Protein A-h ELISA kit （human IgG）
F400	Protein A ELISA kit

1.CHO HCP ELISA kit（F015）

zui常用的用于檢測中國倉鼠卵巢細胞宿主蛋白試劑盒。

1）CHO HCP ELISA kit（F015）盒子組成

2）操作流程（中文操作流程僅供參考，實驗請參照原裝英文說明書）

客戶可以根據(jù)檢測靈敏度的需要，選擇其中一種檢測方法。

兩種操作方法的比較：

	Rapid protocol	High sensitivity protocol
標(biāo)準品	0,4,20,75,250ng/ml	0,1,4,20,75ng/ml
檢測耗時	2+1.5=3.5h	2+2+1.5=5.5h
靈敏度	2 ng/ml	<500pg/ml

2. E.coli HCP ELISA kit（F410）

針對利用E.coli生產(chǎn)相關(guān)藥物的客戶，檢測大腸桿菌宿主蛋白殘留物的利器。

1）E.coli HCP ELISA kit（F410）盒子組成

2）操作流程（中文操作流程僅供參考，實驗請參照原裝英文說明書）

3. Pichia pastoris HCP ELISA kit（F140）

真核表達系統(tǒng)（畢赤酵母）宿主細胞殘留物檢測試劑盒。

1）Pichia pastoris HCP ELISA kit盒子組成

2）兩種不同的操作流程

兩種操作方法的比較：

	Rapid protocol	Standard protocol
標(biāo)準品	0,4,20,75,250ng/ml	0,1,4,20,75ng/ml
檢測耗時（h）	1+0.5=1.5	3+0.5=3.5
靈敏度	<75 ng/ml	<0.3 ng/ml

4. BSA ELISA kit （F030）

細胞培養(yǎng)添加物BSA的檢測試劑盒。

1）BSA ELISA kit （F030）盒子組成

2）操作步驟

5. Protein A的檢測試劑盒

針對開發(fā)抗體藥，檢測純化過程中殘留的Protein A，也有其他相關(guān)應(yīng)用，分為三款F050、F050H和F400，其中F400是產(chǎn)品，是靈敏度zui高、效果的檢測Protein A的試劑盒。

1）三個試劑盒的組成

2）三個試劑盒的差別

貨號	標(biāo)記系統(tǒng)	底物	靈敏度	檢測對象	處理步驟
F050	生物素， AP偶聯(lián)的抗體	PNPP	120pg/mL	重組的Protein A	無熱處理
F050H	生物素， AP偶聯(lián)的抗體	PNPP	100pg/mL	人源化的Protein A	熱處理
F400	HRP	TMB	50pg/mL	重組修飾的Protein A	熱處理

二、Cygnus WB檢測產(chǎn)品

WB也是檢測宿主細胞蛋白的手段，Cygnus的WB kits里的抗體跟相應(yīng)的Elisa Kits是一樣的，WB kits里面包括酶標(biāo)抗體、陽性抗原、酶底物和封閉濃縮液，Cygnus的WB產(chǎn)品共有11種。具體產(chǎn)品可以參照下列（http://www.cygnustechnologies.com/category/western-blot-kits.html

）

部分WB產(chǎn)品：

貨號	品名	種屬性	對應(yīng)的Elisa
F415	E.coli HCP WB kit	Bacterial	F410
F145	Pichia pastoris HCP WB kit	Yeast	F140
F185	SP2/0 HCP WB kit	Mammalian	F180
F060	CHO HCP WB kit	Mammalian	F015

三、 Cygnus免疫學(xué)產(chǎn)品

免疫學(xué)產(chǎn)品全部是Elisa和WB盒子里面的相關(guān)產(chǎn)品，提供抗體、抗原濃縮液（對照/標(biāo)準品）、緩沖液和洗滌液等。

大部分抗體為山羊和兔來源，偶有豬抗，抗體貨號有前后綴，不同后綴代表的意思不同。Cygnus抗體共有117種，眾多抗體產(chǎn)品參照下列*：http://www.cygnustechnologies.com/category/antibodies.html

抗體的前綴/后綴代表的意義：

PA或者PG是IgG片段

AF是親和純化的抗體

AF-AP偶聯(lián)了AP的親和純化抗體

AF-B偶聯(lián)了生物素的親和純化抗體

AF-HRP是偶聯(lián)了HRP的親和純化抗體

下面為部分抗體產(chǎn)品：

貨號	貨名	類型	規(guī)格
A549	anti-A549 HCP	Goat, neat serum	1 ml
A549-AF	anti-A549 HCP	Goat, affinity purified	1 mg
A549-PA	anti-A549 HCP	Goat, IgG fraction	1 ml
C0016AF-HRP	anti-CHO HCP	Goat , affinity purified:HRP	1 mg
C0016	anti-CHO HCP	Goat, neat serum	1 ml
AP117	anti-E.coli HCP	Goat, affinity purified	1 mg
AF117B	anti-E.coli HCP	Goat,affinity purified:biotinylated	1 mg
PI-49	anti-P. pastoris HCP	Goat, neat serum	1 ml
PI-49AF-AP	anti-P. pastoris HCP	Goat,affinity purifed:alkaline phosphatase labeled	1 ml