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evidentic ?開發(fā)基于抗藥物抗體 (ADA) 的檢測方法介紹

更新時間:2022-07-25      點擊次數(shù):6170


evidentic 開發(fā)基于抗藥物抗體 (ADA) 的檢測方法介紹


將生物治療藥物施用于患者可能會引發(fā)免疫反應(yīng),從而導(dǎo)致抗藥物抗體 (ADAs) 的產(chǎn)生。ADA 影響產(chǎn)品的藥代動力學(xué)特征、藥效學(xué)作用、臨床療效或安全性。

生物制品*改變了制藥行業(yè)。但這些藥物,包括單克隆抗體 (mAbs),當(dāng)給予患者時可能會引發(fā)免疫反應(yīng),從而導(dǎo)致抗藥物抗體 (ADAs)的發(fā)展。隨著生物制品市場的繁榮和新型抗體形式的興起,如雙特異性抗體、抗體片段和抗體偶聯(lián)物,免疫原性評估已成為重要標(biāo)準(zhǔn)。

 

決定生物藥物免疫原性的因素可以是:

  • 內(nèi)在——分子結(jié)構(gòu)、宿主細(xì)胞 DNA/蛋白質(zhì)、配方;

  • 外源性——劑量、途徑、內(nèi)源性對應(yīng)物;

  • 宿主相關(guān)——遺傳特征、免疫狀態(tài)、疾病狀態(tài)。

 

了解可能對產(chǎn)品的藥代動力學(xué)特征、藥效學(xué)作用、臨床療效或安全性產(chǎn)生不利影響的 ADA 的發(fā)生率或影響,這在任何治療性蛋白質(zhì)產(chǎn)品開發(fā)計劃中至關(guān)重要。因此,生物治療藥物產(chǎn)生的免疫原性引起了監(jiān)管機(jī)構(gòu)、行業(yè)和臨床醫(yī)生的極大關(guān)注。

 

如何檢測和表征 ADA?

在接受生物藥物治療的患者中發(fā)生的 ADA 可分為兩種主要類型:

1. 中和阻斷,直接干擾藥物與其靶點結(jié)合的能力;

2. 識別藥物上其他表位但仍允許抗原結(jié)合活性的非中和性 ADA。例如,針對藥物 Fc 區(qū)的抗體。

血清樣品中中和和非中和 ADA 的測定對于藥物開發(fā)的臨床前和臨床階段非常重要。該過程涉及 (1) 篩選測定,(2) 確認(rèn)測定,和 (3) 表征測定。

 

篩選試驗

這些技術(shù)檢測治療性蛋白質(zhì)中 ADA 的存在。在施用生物治療產(chǎn)品后,篩選測定評估每個患者樣本中和患者樣本之間的多克隆抗體。酶聯(lián)免疫吸附試驗 (ELISA)、放射免疫沉淀試驗 (RIPA) 等方法和電化學(xué)發(fā)光 (ECL)、珠基試驗、Gyrolab 系統(tǒng)、表面等離子共振 (SPR)、生物層干涉測量等新技術(shù)均可用于確定免疫原性的初步篩選試驗。

 

為篩選 ADA 開發(fā)的平臺必須考慮:

  • 適合治療的格式和設(shè)計;

  • 用于測定靈敏度的陽性對照;

  • 檢測具有所需特異性(IgM、IgG 亞類等)的抗體的能力;

  • 來自治療本身的潛在干擾、來自聯(lián)合用藥和/或疾病特異性問題(例如,類風(fēng)濕因子 (RF)、藥物靶標(biāo))的干擾。

 

為檢測生物治療產(chǎn)品而開發(fā)的所有篩選試驗都必須在各自的實驗室內(nèi)進(jìn)行優(yōu)化 和驗證,以確保重現(xiàn)性和準(zhǔn)確性。 將篩選測定結(jié)果解釋為抗體陽性或抗體陰性由“切點"(閾值)策略定義。

從 Evidentic購買經(jīng)批準(zhǔn)的生物藥物等分試樣,作為 ADA 檢測的校準(zhǔn)品。

 

驗證性分析

這些測定證實了 ADA 對特定治療性抗體的特異性。這種方法通過在同一測定中向處理和未處理的樣品中添加過量抗原來消除篩選測定中鑒定的假陽性樣品。樣品中 ADA 的存在通過處理樣品與未處理樣品的信號降低來確認(rèn)。

 

表征分析

一旦確認(rèn)特定藥物的 ADA 存在,表征 ADA 就很重要。陽性樣品的表征、滴度測定、中和潛力的評估、免疫球蛋白類別和亞類、同種型的闡明等。這些因素有助于更好地了解生物藥物的免疫原性及其臨床影響。在這方面,中和測定對于評估 ADA 中和治療性抗體的生物活性的能力至關(guān)重要?;诩?xì)胞的生物測定或基于非細(xì)胞的競爭性配體結(jié)合 (CLB) 測定是可用于檢測中和 ADA 的兩種主要體外方法,必須根據(jù)時間消耗、易于實施的方案和適當(dāng)檢測對藥物療效的影響。

 

抗特型抗體

抗特型抗體 (anti-IDs) 是在抗體藥物的 Fv 區(qū)域(也稱為特型)內(nèi)特異性結(jié)合抗原結(jié)合位點的 ADA。當(dāng)前一代獲批的抗體藥物是人源化或*人源化的,其中特型是“外來"序列。因此,抗 ID 通常是響應(yīng)大多數(shù)抗體藥物而產(chǎn)生的最常見的 ADA。

閱讀更多:治療性抗體的出現(xiàn)

 

除此之外,抗 ID 已成為免疫原性和藥代動力學(xué)研究的重要體外診斷工具。對于分析開發(fā),在動物模型中產(chǎn)生針對生物藥物的抗 ID,通常是小鼠/兔單克隆或多克隆。根據(jù)anti-ID在抗體藥物Fv上的結(jié)合位點,anti-ID抗體可以是中和的也可以是非中和的,分為三種類型:

  1. 互補(bǔ)位特異性或抗原阻斷抗-ID:直接與抗體藥物的抗原結(jié)合位點結(jié)合,直接與靶抗原競爭。這些是中和抗 ID,可用于檢測血清中游離/未結(jié)合的藥物分子;

  2. Non-blocking anti-IDs:結(jié)合位點不與抗體藥物的互補(bǔ)位重疊,使藥物與靶標(biāo)結(jié)合。這些是非中和的,可以結(jié)合并檢測血清中的總藥物,包括游離藥物和結(jié)合/部分結(jié)合的藥物;

  3. 復(fù)合物特異性抗 ID:僅與抗體藥物靶復(fù)合物結(jié)合。這些是非中和的,可用于檢測血清中的結(jié)合藥物。

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使用抗 ID 和多克隆 ADA 的體外測定用于免疫原性研究。然而,抗 ID 更常用于藥代動力學(xué) (PK) 研究。由于 PK 研究著眼于藥物代謝,因此抗 ID 尤其有助于檢測血清、尿液和其他體液中結(jié)合或未結(jié)合的藥物。

此外,在生物仿制藥開發(fā)方面,抗 ID 是免疫原性可比性研究的重要工具。在生物仿制藥開發(fā)的早期階段,使用抗 ID 的篩選和功能測定可以幫助確認(rèn)候選生物仿制藥對原研分子或參考產(chǎn)品的抗原特異性。用于確認(rèn)生物仿制藥特異性的一些常用檢測方法包括:

  • 橋接試驗——抗 ID 用于捕獲和檢測生物仿制藥;

  • 流式細(xì)胞術(shù)——藥物靶向特異性抗 ID 用于檢測與其配體結(jié)合在細(xì)胞上的生物仿制藥;

  • 結(jié)合抑制——中和或阻斷抗 ID 用于確認(rèn)生物仿制藥是否與細(xì)胞上的目標(biāo)配體結(jié)合;

  • 直接 ELISA 測試——抗 ID 可用于篩選候選生物仿制藥,因為它不會與不適合 CDR 序列的 mAb 結(jié)合。

 

此外,還進(jìn)行了比較臨床試驗,以評估生物仿制藥和參考產(chǎn)品的免疫原性。這些試驗必須在最敏感的患者群體中進(jìn)行,并使用相同的臨床方案(例如,給藥途徑、治療計劃、取樣程序、取樣時間點,包括基線/治療前樣品和儲存條件)和抗體測定生成有效的比較數(shù)據(jù)。所需的免疫原性數(shù)據(jù)量取決于從參考產(chǎn)品和/或產(chǎn)品類別中獲得的經(jīng)驗。這種基于證據(jù)的數(shù)據(jù)有助于臨床醫(yī)生/醫(yī)師消除對將患者轉(zhuǎn)換為生物仿制藥或多種生物仿制藥的擔(dān)憂。

 

用于 ADA 檢測開發(fā)的明顯等分試樣

Evidentic 提供分析數(shù)量的商業(yè)批準(zhǔn)的生物制劑和治療性抗體(嵌合、人源化和人類 mAb),可用作開發(fā)和制造體外診斷測定的校準(zhǔn)物、陽性、陰性或質(zhì)量控制。

Evidentic 等分試樣是開發(fā)抗特型抗體、抗藥物抗體 (ADA) 檢測試驗和其他利用抗人偶聯(lián)二抗的體外 診斷試驗的理想選擇。

 

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