• CD40/CD40L 信號傳導的體內(nèi)阻斷

帕斯夸爾，G.，等。(2018)?！巴ㄟ^細胞間酶標記監(jiān)測體內(nèi) T 細胞-樹突細胞相互作用。" 自然 553(7689)：496-500。

不同細胞類型之間的相互作用對于多種生物過程至關重要，包括免疫、胚胎發(fā)育和神經(jīng)元信號傳導。盡管可以通過活體顯微鏡在體內(nèi)監(jiān)測細胞間相互作用的動態(tài)，但這種方法不能提供有關受體和配體的任何信息，也不能分離相互作用的細胞以進行下游分析。在這里，我們描述了一種互補方法，該方法使用細菌分選酶 A 介導的跨免疫細胞突觸的細胞標記來識別活體小鼠細胞之間的受體-配體相互作用，方法是產(chǎn)生隨后可以通過流式細胞術在體外檢測到的信號。我們將這種用于標記免疫細胞之間“親吻和奔跑"相互作用的方法稱為“通過 SorTagging 細胞間接觸標記免疫伙伴關系"（LIPSTIC）。使用 LIPSTIC，我們表明在體內(nèi) T 細胞啟動期間樹突狀細胞和 CD4(+) T 細胞之間的相互作用以兩種不同的方式發(fā)生：早期的同源階段，在此期間，CD40-CD40L 相互作用特異性地發(fā)生在 T 細胞和抗原之間。加載樹突狀細胞；以及后來的非同源階段，在此期間，這些相互作用不再需要 T 細胞受體的事先參與。因此，LIPSTIC 能夠直接測量體外和體內(nèi)的動態(tài)細胞間相互作用。鑒于其與不同受體-配體對和一系列可檢測標記一起使用的靈活性，

• CD40/CD40L 信號傳導的體內(nèi)阻斷

敬畏，O.，等。(2015)?！癟 濾泡輔助細胞中的 PU.1 表達限制了 CD40L 依賴性生發(fā)中心 B 細胞的發(fā)育。" J免疫學。

PU.1 是一種 ETS 家族轉(zhuǎn)錄因子，對多種造血細胞譜系的發(fā)育很重要。以前的工作證明了 PU.1 在促進 Th9 發(fā)育和限制 Th2 細胞因子產(chǎn)生方面的關鍵作用。PU.1 在其他 Th 譜系中是否具有功能尚不清楚。在這項研究中，我們檢查了 PU.1 在 CD4+ T 細胞中異位表達的影響，并觀察到與 T 濾泡輔助 (Tfh) 細胞功能相關的基因表達降低，包括 Il21 和 Tnfsf5（編碼 CD40L）。來自在 T 細胞中缺乏 PU.1 表達的條件性突變小鼠的 T 細胞 (Sfpi1lck-/-) 證明體外 CD40L 和 IL-21 的產(chǎn)生增加。在佐劑依賴性或佐劑非依賴性免疫后，我們觀察到 Sfpi1lck-/- 小鼠的 Tfh 細胞數(shù)量增加，生發(fā)中心 B 細胞（GCB 細胞）增加，體內(nèi)抗體產(chǎn)量增加。與對照小鼠相比，這與來自 Sfpi1lck-/- 小鼠的 Tfh 細胞中 IL-21 和 CD40L 的表達增加相關。最后，雖然阻斷 IL-21 不會影響 Sfpi1lck-/- 小鼠中的 GCB 細胞，但免疫 Sfpi1lck-/- 小鼠的抗 CD40L 治療降低了 GCB 細胞數(shù)量和 Ag 特異性 Ig 濃度。總之，這些數(shù)據(jù)表明 PU.1 在 Tfh 細胞、生發(fā)中心和 Tfh 依賴性體液免疫的功能中具有抑制作用。免疫的 Sfpi1lck-/- 小鼠的抗 CD40L 治療降低了 GCB 細胞數(shù)量和 Ag 特異性 Ig 濃度。總之，這些數(shù)據(jù)表明 PU.1 在 Tfh 細胞、生發(fā)中心和 Tfh 依賴性體液免疫的功能中具有抑制作用。免疫的 Sfpi1lck-/- 小鼠的抗 CD40L 治療降低了 GCB 細胞數(shù)量和 Ag 特異性 Ig 濃度?？傊?，這些數(shù)據(jù)表明 PU.1 在 Tfh 細胞、生發(fā)中心和 Tfh 依賴性體液免疫的功能中具有抑制作用。

• CD40/CD40L 信號傳導的體內(nèi)阻斷

布拉塞特，J.，等。(2015)?！霸诳赡嫘越Y(jié)腸炎的新小鼠模型中，疾病的發(fā)展和維持都需要 CD4 T 細胞。" 粘膜免疫學。doi：10.1038/mi.2015.93。

目前治療炎癥性腸病的療法療效有限，副作用顯著，并且通常會隨著時間的推移而減弱。關于在結(jié)腸炎粘膜愈合過程中起作用的細胞和分子機制知之甚少。為了研究此類事件，我們開發(fā)了一種新的可逆性結(jié)腸炎模型，其中將 CD4+CD45RBhi T 細胞過繼轉(zhuǎn)移到傷寒桿菌定植的淋巴細胞減少小鼠中，導致結(jié)腸炎癥的快速發(fā)作，而這種炎癥可通過消耗致結(jié)腸炎 T 細胞來逆轉(zhuǎn)。緩解與臨床和組織病理學評分的改善、腸粘膜免疫細胞浸潤減少、腸道基因表達譜改變、結(jié)腸粘液層再生以及上皮屏障完整性的恢復有關。尤其，致結(jié)腸炎 T 細胞不僅對結(jié)腸炎的誘導至關重要，而且對疾病的維持也很重要。致結(jié)腸炎 T 細胞的消耗導致腫瘤壞死因子 α (TNFα) 水平迅速下降，這與炎癥免疫細胞對炎癥部位的浸潤減少有關。雖然中和 TNFalpha 阻止了結(jié)腸炎的發(fā)作，但對患有已確定疾病的小鼠進行抗 TNFalpha 治療未能解決結(jié)腸炎癥。總的來說，這種可逆性結(jié)腸炎的新模型為研究慢性腸道緩解-復發(fā)性疾病的粘膜愈合動力學提供了重要的研究工具。致結(jié)腸炎 T 細胞的消耗導致腫瘤壞死因子 α (TNFα) 水平迅速下降，這與炎癥免疫細胞對炎癥部位的浸潤減少有關。雖然中和 TNFalpha 阻止了結(jié)腸炎的發(fā)作，但對患有已確定疾病的小鼠進行抗 TNFalpha 治療未能解決結(jié)腸炎癥?？偟膩碚f，這種可逆性結(jié)腸炎的新模型為研究慢性腸道緩解-復發(fā)性疾病的粘膜愈合動力學提供了重要的研究工具。致結(jié)腸炎 T 細胞的消耗導致腫瘤壞死因子 α (TNFα) 水平迅速下降，這與炎癥免疫細胞對炎癥部位的浸潤減少有關。雖然中和 TNFalpha 阻止了結(jié)腸炎的發(fā)作，但對患有已確定疾病的小鼠進行抗 TNFalpha 治療未能解決結(jié)腸炎癥?？偟膩碚f，這種可逆性結(jié)腸炎的新模型為研究慢性腸道緩解-復發(fā)性疾病的粘膜愈合動力學提供了重要的研究工具。

• CD40/CD40L 信號傳導的體內(nèi)阻斷

康德，P.，等。(2015)。“DC-SIGN(+) 巨噬細胞控制移植耐受的誘導。" 豁免權 42(6)：1143-1158。 

單核細胞譜系的組織效應細胞可以根據(jù)其環(huán)境分化為具有特定細胞功能的不同細胞類型。介導移植耐受誘導的免疫保護性巨噬細胞的表型、發(fā)育要求和功能機制仍然難以捉摸。在這里，我們證明共刺激有利于抑制 CD8(+) T 細胞免疫并促進 CD4(+) Foxp3(+) Treg 細胞擴增的表達 DC-SIGN 的巨噬細胞的積累。從機制上講，巖藻糖基化配體和 TLR4 信號傳導的同時 DC-SIGN 參與是產(chǎn)生與延長同種異體移植物存活相關的免疫調(diào)節(jié) IL-10 所必需的。在體內(nèi)刪除表達 DC-SIGN 的巨噬細胞，干擾其 CSF1 依賴性發(fā)育，或阻止 DC-SIGN 信號通路消除耐受性?？傊?，這些結(jié)果為共刺激阻斷的致耐受效應提供了新的見解，并將 DC-SIGN(+) 抑制性巨噬細胞鑒定為免疫耐受的關鍵介質(zhì)，并伴隨臨床治療意義。

• CD40/CD40L 信號傳導的體內(nèi)阻斷

米勒，ML 等。(2015)?！凹毙耘懦夂笠浦材褪苄缘淖园l(fā)恢復。" 國家通訊社 6：7566。

移植是治療終末期器官衰竭的一種方法，但在沒有藥物免疫抑制的情況下，同種異體器官會被急性排斥。這種排斥總是導致同種異體致敏和二級供體匹配移植物的加速排斥?？梢栽趧游锖鸵徊糠秩祟愔姓T導移植耐受性，并且可以長期接受同種異體移植物而無需維持免疫抑制。然而，移植排斥可能在獲得移植耐受狀態(tài)很久之后發(fā)生。當這種同種異體移植物被拒絕時，假定同種異體致敏規(guī)則適用于非耐受宿主，并且免疫耐受性喪失。我們使用心臟移植的小鼠模型表明，當單核細胞增生李斯特菌感染導致急性排斥反應時，因此廢除移植耐受性，供體特異性耐受狀態(tài)重新出現(xiàn)，允許自發(fā)接受供體匹配的第二次移植。這些數(shù)據(jù)表明，同種異體移植耐受的記憶勝過移植排斥的記憶。

• CD40/CD40L 信號傳導的體內(nèi)阻斷

Ballesteros-Tato, A. 等。(2014)。“通過抗原呈遞到流感特異性 CD8(+) T 細胞的不同持續(xù)時間對記憶編程的表位特異性調(diào)節(jié)。" 豁免 41(1)：127-140。

記憶 CD8(+) T 細胞在初級反應期間被編程，以獲得穩(wěn)健的次級反應。在這里，我們顯示 CD8(+) T 細胞對流感病毒的不同表位作出反應，在初級反應期間收到了質(zhì)上不同的信號，從而改變了它們的次級反應性。核蛋白 (NP) 特異性 CD8(+) T 細胞在初級反應的后期遇到 CD40 許可、CD70 表達、CD103(-)CD11b(hi) 樹突狀細胞 (DC) 上的抗原。因此，它們維持 CD25 表達并對白細胞介素 2 (IL-2) 和 CD27 做出反應，這兩者共同編程了它們強大的二次增殖能力和干擾素-γ (IFN-γ) 產(chǎn)生能力。相比之下，聚合酶 (PA) 特異性 CD8(+) T 細胞在初級反應的后期沒有遇到攜帶抗原的、CD40 激活的 DC，沒有接受 CD27 和 CD25 信號，也沒有被編程為具有強大增殖和細胞因子產(chǎn)生能力的記憶 CD8(+) T 細胞。因此，CD8(+) T 細胞響應豐富的抗原，如 NP，主導了二次反應。

• CD40/CD40L 信號傳導的體內(nèi)阻斷

• CD40/CD40L 信號的體外阻斷

Krummey, SM, 等。(2014)。“與 Th1 細胞相比，念珠菌引起的鼠 Th17 細胞表達高 Ctla-4，并且對共刺激阻斷具有抗性。" J Immunol 192(5): 2495-2504。

效應和記憶 T 細胞可能與同種異體 Ag 發(fā)生交叉反應以介導移植排斥。盡管對 Th1 細胞的共刺激特性進行了充分研究，但對微生物引發(fā)的 Th17 細胞的共刺激要求知之甚少。共刺激阻滯劑 CTLA-4 Ig 在治療幾種 Th17 驅(qū)動的自身免疫性疾病方面無效，并且與腎移植后的嚴重急性排斥有關，導致我們研究 Th17 細胞是否在 CD28/CTLA-4 阻滯抵抗中起作用異體反應。我們建立了一個 Ag 特異性模型，其中 Th1 和 Th17 細胞分別通過結(jié)核分枝桿菌和白色念珠菌免疫引起。C。白色念珠菌免疫引起更高頻率的 Th17 細胞，并賦予移植后對共刺激阻斷的抗性。與結(jié)核分枝桿菌組相比，白色念珠菌誘導的 Th17 細胞含有較高頻率的 IL-17(+)IFN-γ(+) 生產(chǎn)者和較低頻率的 IL-10(+) 和 IL-10(+) )IL-17(+) 細胞。重要的是，Th17 細胞差異調(diào)節(jié) CD28/CTLA-4 通路，與 Th1 細胞相比，表達同樣高的 CD28，但 CTLA-4 的量顯著增加。離體阻斷實驗表明 Th17 細胞對 CTLA-4 共抑制更敏感，因此對 CTLA-4 Ig 不太敏感。

• CD40/CD40L 信號傳導的體內(nèi)阻斷

馬歇爾，D.，等。(2014)。“胸腺調(diào)節(jié)性 T 細胞分叉發(fā)育期間對 IL-2 和 IL-15 的不同需求。" 免疫學雜志 193(11)：5525-5533。

尚未*了解胸腺中調(diào)節(jié)性 T 細胞 (T(reg)) 生成的發(fā)育途徑。在這項研究中，我們用四環(huán)素誘導的 Zap70 轉(zhuǎn)基因重組了 Zap70 缺陷胸腺細胞的胸腺發(fā)育，以允許 T(reg) 發(fā)育的時間解剖。我們發(fā)現(xiàn) T(reg) 以*的動力學發(fā)展，首先出現(xiàn)在 CD4 單陽性 (SP) 胸腺細胞中的第 4 天。CD25(+)Foxp3(+) T(reg) 選擇的*模型建議通過 CD25(+)Foxp3(-) CD4 SP 前體進行開發(fā)。相比之下，我們的動力學分析顯示存在豐富的 CD25(-)Foxp3(+) 細胞，這些細胞在響應 IL-2 時非常有效地成熟為 CD25(+)Foxp3(+) 細胞。CD25(-)Foxp3(+) 細胞在發(fā)展動力學和自身肽MHC 的親和力方面更接近成熟的T(reg)。這些群體在發(fā)育過程中也表現(xiàn)出對細胞因子的不同需求。CD25(-)Foxp3(+) 細胞依賴于 IL-15，而 CD25(+)Foxp3(+) 的產(chǎn)生則特別需要 IL-2。最后，我們發(fā)現(xiàn) IL-2 和 IL-15 來自體內(nèi)不同的來源。IL-15 是基質(zhì)來源的，而 IL-2 僅來自依賴完整 CD4 譜系發(fā)育的造血細胞，而不是經(jīng)歷 Ag 的細胞或 NKT 細胞。

• CD40/CD40L 信號傳導的體內(nèi)阻斷

Baumjohann, D. 等。(2013)?！俺志眯钥乖蜕l(fā)中心 B 細胞維持 T 濾泡輔助細胞反應和表型。" 免疫 38(3)：596-605。

T 濾泡輔助 (Tfh) 細胞為 B 細胞提供幫助，對于生發(fā)中心 (GC) 反應的建立至關重要，包括產(chǎn)生高親和力抗體和記憶 B 細胞和長壽漿細胞。在這里，我們報告 Tfh 細胞反應的大小由抗原量決定，并與 GC B 細胞反應的大小直接相關。此外，維持 Tfh 細胞表型需要 GC B 細胞持續(xù)的抗原刺激。在淋巴細胞減少的情況下，強烈且持續(xù)的 Tfh 細胞反應導致旁觀者 B 細胞激活、高丙種球蛋白血癥以及多反應性抗體和自身反應性抗體的產(chǎn)生。這些數(shù)據(jù)表明抗原劑量決定了 Tfh 細胞反應和 GC 反應的大小和持續(xù)時間，

• CD40/CD40L 信號傳導的體內(nèi)阻斷

Hofstetter，AR 等。(2012)。“MHC Ib 類限制性 CD8 T 細胞在小鼠多瘤病毒感染過程中依賴于 CD4 T 細胞幫助和 CD28 共刺激而有所不同。" 免疫學雜志 188(7)：3071-3079。

我們最近發(fā)現(xiàn)了一種保護性 MHC Ib 類限制性 CD8 T 細胞對小鼠多瘤病毒感染的反應。這些 CD8 T 細胞識別來自 VP2 病毒衣殼蛋白的 aa 139-147 的肽，該肽與非多態(tài)性 H-2Q9 分子結(jié)合，該分子是與β(2)m 相關的 MHC Ib 類分子的 Qa-2 家族的成員。Q9：VP2.139 特異性 CD8 T 細胞表現(xiàn)出不尋常的通貨膨脹反應，其特征是在 3 個月內(nèi)逐漸擴張，然后是穩(wěn)定的維持階段。我們之前已經(jīng)證明 Q9:VP2.139 特異性 CD8 T 細胞依賴于 Ag 進行擴增，但不依賴于長期維持。在這項研究中，我們檢驗了 Q9:VP2.139 特異性 T 細胞反應的擴增和維持成分不同地依賴于 CD4 T 細胞幫助和 CD28 共刺激的假設。CD4(+) 細胞和 CD28/CD40L 消耗削弱了 Q9:VP2.139 特定 CD8 T 細胞的擴張，并且內(nèi)在的 CD28 信號足以進行擴張。相比之下，CD4 T 細胞不足，而不是 CD28/CD40L 阻斷，導致 Q9:VP2.139 特異性 CD8 T 細胞在維持階段的頻率下降。這些結(jié)果表明 Q9:VP2.139 特異性 CD8 T 細胞對小鼠多瘤病毒感染的反應依賴于 CD4 T 細胞幫助和 CD28 共刺激以促進膨脹，但僅依賴于 CD4 T 細胞幫助維持。

• CD40/CD40L 信號傳導的體內(nèi)阻斷

泰勒、JJ 等人。(2012)。“一種不依賴生發(fā)中心的途徑在初級反應的早期產(chǎn)生未轉(zhuǎn)換的記憶 B 細胞。" J Exp Med 209(3): 597-606。

記憶 B 細胞可以從經(jīng)典的生發(fā)中心 (GC) 途徑或不太了解的 GC 獨立途徑產(chǎn)生。我們使用基于抗原的細胞富集來評估這些途徑對多克隆記憶 B 細胞庫的相對貢獻。我們確定了一個 CD38(+) GL7(+) B 細胞前體群體，它以響應強 CD40 刺激的 GC 獨立方式直接分化為 IgM(+) 或同種型轉(zhuǎn)換 (sw) Ig(+) 記憶 B 細胞?；蛘撸珻D38(+) GL7(+) B 細胞前體有可能成為 Bcl-6(+) GC 細胞，然后主要生成 swIg(+) 記憶 B 細胞。這些結(jié)果表明早期 IgM(+) 和 swIg(+) 記憶 B 細胞是獨立于 GC 的途徑的產(chǎn)物，而后來切換的 Ig(+) 記憶 B 細胞是 GC 細胞的產(chǎn)物。

• CD40/CD40L 信號傳導的體內(nèi)阻斷

西、EE 等。(2011)?！坝洃?CD8(+) T 細胞的嚴格調(diào)節(jié)限制了它們在持續(xù)高病毒載量期間的有效性。" 豁免 35(2)：285-298。 

要設計成功的慢性病疫苗，了解記憶 CD8(+) T 細胞對持久性抗原再刺激的反應至關重要。然而，大多數(shù)比較記憶和初始細胞反應的研究僅在快速清除的急性感染中進行。在此，通過比較記憶和幼稚 CD8(+) T 細胞對急性和慢性淋巴細胞脈絡叢腦膜炎病毒感染的反應，我們表明記憶細胞在幼稚細胞上占主導地位，并且在存在足夠數(shù)量時具有保護作用，可以快速減少感染。相反，當感染沒有迅速減少時，由于高抗原負荷或持續(xù)存在，記憶細胞會迅速丟失，這與幼稚細胞不同。這種記憶細胞的喪失是由于抑制細胞增殖、抑制性受體 2B4 的選擇性調(diào)節(jié)、并增加對 CD4(+) T 細胞幫助的依賴。因此，強調(diào)設計能引發(fā)有效 CD4(+) T 細胞幫助和快速控制感染的疫苗的重要性。