PB-CMV-MCS-EF1α-GreenPuro PiggyBac cDNA Cloning and Expression Vector

systembio PB513B-1說明書

PB-CMV-MCS-EF1α-GreenPuro-PiggyBac cDNA克隆及表達載體
使用PiggyBac輕松傳遞你感興趣的基因-這個載體包括GFP和puro報告者，并用強CMV啟動子驅動你的cDNA
單次轉染制備轉基因細胞系
一次轉染整合多個PiggyBac載體
將表達盒插入人、小鼠和大鼠細胞
提供幾乎任何大小的DNA插入，從10-100 kb
從PiggyBac載體中選擇，這些載體從組成性或誘導性啟動子中表達你感興趣的基因，并包括多種標記

PB513B-1

PB-CMV-MCS-EF1α-GreenPuro cDNA cloning and expression vector

10 µg

概述
輕松一致地進行轉基因
SBI的PiggyBac轉座子系統具有一致性和易用性，包括克隆和表達載體，這些載體帶有一系列標記以及組成性和誘導性啟動子。PB-CMV-MCS-EF1α-GreenPuro-PiggyBac cDNA克隆和表達載體（Cat.#PB513B-1）可從CMV強啟動子中表達你感興趣的基因，并從EF1α啟動子中表達GFP報告子和嘌呤霉素抗性。

為什么要使用PiggyBac轉座子系統？

簡單，一致的轉基因，不受貨物大小的限制 -對于簡單，一致且不受貨物大小限制的轉基因，SBI的PiggyBac轉座子系統是的選擇。該系統由PiggyBac載體和Super PiggyBac轉座酶組成，后者識別轉座子特異的反向末端重復序列（ITR），并有效地將ITR和插入的DNA整合到TTAA位點的基因組中。超級PiggyBac轉座酶通過Super PiggyBac轉座酶表達載體傳遞到細胞中，該載體與一種或多種PiggyBac載體共轉染。

無占用空間的清除方法，不留下任何PiggyBac序列 -除了易于使用，一致性和對DNA插入片段大小的限制之外，該系統與眾不同的是它能夠在無占用空間的情況下逆轉整合反應方式—僅使用Exhibition PiggyBac轉座酶（目錄號PB220PA-1），即可去除Super PiggyBac轉座酶整合到基因組中的ITR和貨物，而無需保留原始的基因組序列。

• 一次轉染即可制作轉基因細胞系
• 在單個轉染中整合多個PiggyBac載體
• 將表達盒插入人，小鼠和大鼠細胞
• 提供幾乎任何大小的10 – 100 kb DNA插入片段
• 從PiggyBac載體中進行選擇，這些載體可從組成型或誘導型啟動子表達您的目標基因，并包含多種標記
• 使用PiggyBac qPCR拷貝數試劑盒（＃PBC100A-1）確定整合事件的數量

客戶協議
學術客戶可以購買PiggyBac轉座子系統組件進行內部研究，以無限期使用，而商業客戶必須簽署客戶協議，獲得為期四個月的有限使用許可，以評估該技術。

PiggyBac轉座子系統的剪切和粘貼機制

高效的PiggyBac轉座子系統使用剪切粘貼機制將DNA從PiggyBac載體轉移到基因組中。如果只需要臨時的基因組整合，則可以將Excision的PiggyBac轉座酶瞬時表達，以無污染地去除插入片段，從而重建原始的基因組序列。

圖1. PiggyBac轉座子系統的剪切和粘貼機制。

• 超級PiggyBac轉座酶與PiggyBac克隆和表達載體中的特定反向末端重復序列（ITR）結合，并切除ITR和插入的DNA。
• 超級PiggyBac轉座酶將ITR表達盒式ITR片段插入TTAA位點的基因組中。
• 僅用于Excision的Super PiggyBac轉座酶可用于從基因組中去除ITR表達盒式ITR片段，從而實現無足跡去除

支持數據

一種轉染可以整合一個或多個可以精確去除的基因

圖2.用超級PiggyBac轉座酶和單啟動子和雙啟動子PiggyBac載體進行高效轉基因。（前四幅圖）將超級PiggyBac轉座酶表達載體（目錄號PB210PA-1）和雙重啟動子PiggyBac克隆和表達載體（目錄號PB513B-1 ）共轉染HeLa細胞證明了SBI的高效整合PiggyBac轉座子系統。選擇嘌呤霉素十天后，僅用Super PiggyBac轉座酶（+ PB，右兩幅圖）共轉染的細胞顯示出強勁的生長和GFP熒光。（底部四個圖）與Super PiggyBac轉座酶表達載體（Cat。＃PB210PA-1）和單個啟動子PiggyBac克隆和表達載體（-Cat。＃PB531A-2）進入HEK293細胞進一步證明了SBI的PiggyBac轉座子系統可實現高效整合。生長7天后，接受Super PiggyBac轉座酶表達載體（+ PB，右兩幅圖）的大多數細胞均為RFP陽性。

圖3.同時集成多個PiggyBac Vector也是高效的。方法：將三種不同的PiggyBac轉座子載體（Cat。＃PB513B-1，Cat。＃PB533A-2和Cat。＃PB531A-2）與Super PiggyBac轉座酶表達（左圖）或不與（右圖）一起共轉染。矢量（貨號PB210PA-1）進入人類HT1080細胞。選擇嘌呤霉素和新霉素持續7天。用Super PiggyBac轉座酶表達載體共轉染的細胞是puro和neo耐藥的，GFP陽性，RFP陽性。嘌呤抗性的背景GFP陽性細胞源于嘌呤霉素選擇過程中的隨機PB513B-1整合。這些細胞中非PiggyBac介導的整合率極低，并且未鑒定出RFP陽性細胞。