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怎樣選購α2-抗纖溶酶 α2-Antiplasmin

更新時間:2017-03-28      點擊次數(shù):4256

中文名:抗纖溶酶

英文名:α2-Antiplasmin

英文簡稱:α2-AP

產(chǎn)生器官:肝臟

簡介:α2-抗纖溶酶(α2-Antiplasmin, α2-AP)是由肝臟合成分泌的,含有452個氨基酸的單鏈糖蛋白,分子量為70 000,屬于絲氨酸酶抑制物家族成員之一,在人血漿中α2-AP是主要的纖溶酶抑制物,在控制纖溶中起關(guān)鍵作用。

實驗:

為此制備α2-AP單克隆抗體,建立ELISA方法用于纖溶系統(tǒng)的監(jiān)測,為進一步提高抗原的免疫原性,減少抗原用量,延長抗原釋放時間,用大分子惰性物質(zhì)如硝酸纖維素膜(NC膜)作為抗原載體進行脾內(nèi)包埋免疫。我們將抗原吸附于NC膜上,沿小鼠左肩正中線下胸背部縱形切口1 cm長,逐層入腹,輕輕牽出脾臟,以刀尖沿脾縱軸輕劃一小口,置入1個三角形載有α2-AP抗原的NC膜,使之*包埋于脾臟內(nèi),觀察無出血后回納脾臟,依次縫合傷口。

間隔3 w后,用同樣方法再進行1次,于加強免疫后第3天取小鼠脾細胞與骨髓瘤細胞(5∶1),用PEG-4000常規(guī)方法進行融合[2,3],HAT培養(yǎng)基選擇培養(yǎng),當克隆長至1/10孔大小時,采用間接ELISA法篩選分泌抗體陽性雜交瘤細胞株,并采用有限稀釋法對陽性雜交瘤細胞進行亞克隆,建立了2株穩(wěn)定分泌抗-α2-AP單克隆抗體的雜交瘤細胞株,分別命名為3H4和2E3,并用α2-AP采用常規(guī)方法免疫家兔,制備抗-α2-AP多克隆抗體血清。

對其中的1株3H4進行研究,其雜交瘤染色體眾數(shù)為96.37±1.90,分泌的抗體為IgG1亞類,kappa型。ELISA檢測腹水效價1∶106,采用飽和硫酸銨鹽析法從腹水純化McAb 3H4,SDS-PAGE檢測有較高純度。3H4抗體對α2-AP標準品為陽性反應(yīng),而對ATIII及纖維蛋白原均為陰性,說明對其無交叉反應(yīng)。此雜交瘤細胞株3 d傳1代,體外傳代培養(yǎng)6個月以上,ELISA檢測抗體滴度無明顯降低。采用ELISA法檢測正常人血漿α2-AP含量,以純化的McAb 3H4包板,兔抗α2-AP為多抗,辣根過氧化物酶標記的羊抗兔IgG作為三抗,以ABTS為底物,ELISA法檢測了30名正常人枸緣酸鈉抗凝血漿(1∶9)α2-AP含量,其結(jié)果為(98±1.99) mg/L。

應(yīng)用范圍:由此可見,制備α2-抗纖溶酶單克隆抗體用以檢測α2-AP,對于了解肝病、血栓性疾病、DIC等許多疾病纖溶改變有著廣泛的應(yīng)用前景,并可用于溶栓治療監(jiān)測[1]

選購指南:

蛋白購買:

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HA2AP-0230Human alpha-2 Antiplasmin1x100 µg2432.85588Haematologic Technologies
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a2APa2-Antiplasmin0.1 mg2635Enzyme Research2016
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抗體購買:

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13081-05021Alpha-2 Antiplasmin, anti-human150 ug2800AssayPro
13081-05011Alpha-2 Antiplasmin, anti-human150 ug2320AssayPro

 

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